[发明专利]一种高效的外源蛋白表达细胞株的筛选方法在审
| 申请号： | 201410662495.4 | 申请日： | 2014-11-19 |
| 公开（公告）号： | CN104404082A | 公开（公告）日： | 2015-03-11 |
| 发明（设计）人： | 陈亮;王佳龙;都业杰 | 申请（专利权）人： | 上海美百瑞生物医药技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 201203 上海*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明属于细胞工程技术领域，具体涉及一种高效的外源蛋白表达细胞株的筛选方法。本发明公开了一种高效的外源蛋白表达细胞株的筛选方法，包括下列步骤：目的蛋白表达载体转染宿主细胞；筛选药物加压，稳定细胞池形成；稳定细胞池细胞接种于半固体培养基中；将细胞克隆从半固体培养基中挑至96孔细胞板中，继续培养4-5天，检测细胞上清中目的蛋白表达量；将表达量排名前50名的细胞扩至24孔板继续培养5天；将24孔板中细胞进一步扩至6孔板中继续培养5天；将6孔板中细胞扩至摇瓶中培养，检测评估不同细胞克隆在悬浮状态下的目的蛋白表达量；将根据摇瓶评估结果，将表达量排名前10名的细胞进行稳定性传代试验；根据细胞株表达目的蛋白的水平及持续表达蛋白的稳定性确立候选细胞株。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 高效 蛋白 表达 细胞株 筛选 方法 | ||
【主权项】：
一种高效的外源蛋白表达细胞株的筛选方法，包括下列步骤：a)目的蛋白表达载体转染宿主细胞；b)筛选药物加压，稳定细胞池形成；c)稳定细胞池细胞接种于半固体培养基中；d)将细胞克隆从半固体培养基中挑至96孔细胞板中，继续培养4‑5天，检测细胞上清中目的蛋白表达量；e)将表达量排名前50名的细胞扩至24孔板继续培养5天；f)将24孔板中细胞进一步扩至6孔板中继续培养5天；g)将6孔板中细胞扩至摇瓶中培养，检测评估不同细胞克隆在悬浮状态下的目的蛋白表达量；h)将根据摇瓶评估结果，将表达量排名前10名的细胞进行稳定性传代试验；i)根据细胞株表达目的蛋白的水平及持续表达蛋白的稳定性确立候选细胞株。
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