[发明专利]一种毛叶铁线莲的组培繁殖方法

摘要

本发明公开了一种毛叶铁线莲的组培繁殖方法，主要通过对初代培养、增殖培养、生根培养以及炼苗移栽的步骤，达到了增殖速度快、遗传性状稳定、繁殖系数高、试管苗生长旺盛的优良效果，毛叶铁线莲的愈伤组织的萌动率达到了98％，增殖倍数达到了5.7倍，生根率达到了100％，最终的成活率达到了96％。

主权项

一种毛叶铁线莲的组培繁殖方法，其特征在于该方法包括下列步骤：(1)外植体的选择：于4～7月采取生长健壮的毛叶铁线莲幼嫩茎段作外植体；(2)材料处理方法：先用软毛刷将毛叶铁线莲表面的灰尘轻轻刷去，用流水冲洗10分钟后用紫外灯照射10min，转入超净工作台，在超净工作台上先用70％的乙醇浸泡10秒，然后再转入滴加了2～3滴土温80的0.1％的升汞溶液中浸泡2‑3min，再用无菌水冲洗3～4次，最后在无菌条件下分割材料，茎段切割成0.4～0.6cm长；(3)初代培养：在无菌的条件下将步骤(2)得到的外植体接种在初代培养基上，该培养基是在3/4MS常规培养基中添加了2.5mg/L的2,4‑D、0.7mg/L的NAA、0.6mg/L的GA，PH 6.5，培养温度为21℃，光照周期13h/d，光强度为2100‑2300lux，待培养14天左右后，新芽长至2.0cm左右时，即开始下一个阶段；(4)增殖培养：将初代培养的外植体新芽剪下接种在继代培养基上，该培养基是在1/2MS常规培养基中添加了2.5mg/L的2,4‑D、0.7mg/L的NAA、0.6mg/L的GA，PH 6.5，培养温度为21℃，光照周期13h/d，光强度为2100‑2300lux，待新芽长至2.0cm时，即开始下一个阶段；(5)生根培养：将继代培养的外植体新芽剪下接种在生根培养基上，该培养基是在MS常规培养基中添加了2.0mg/L的IAA、0.8mg/L的NAA，1.2mg/L的KT，PH 6.5，培养温度为24℃，光照周期13h/d，光强度为2000lux，待新苗长至2.0cm时，即开始下一个阶段；(6)炼苗移栽：先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗7d，然后解开封口膜，炼苗3d，炼苗期间适当遮光，使光照强度为自然光的40％，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到经消毒的重量比砻糠灰∶珍珠岩：蛭石＝1∶2∶2的混合基质中，温度控制在25℃，前5d湿度控制在80％左右，以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下。