[发明专利]一种液质联用定量检测小鼠体内S-构型利伐沙班及R-构型利伐沙班药物浓度的方法

摘要

本发明公开一种液质联用定量检测小鼠体内S-构型利伐沙班及R-构型利伐沙班药物浓度的方法，即首先将小鼠血浆样品进行预处理，然后将预处理后小鼠血浆样品依次经液相、质谱联用进行分析，最后采用外标法定量，使用峰面积计算出血浆中S-构型利伐沙班及R-构型利伐沙班药物浓度。该方法缩短了手性分离的时间，分析时间仅为13min。该方法的检测限为3ng/mL，定量限为10ng/mL，在0.01-10μg/mL范围内线性关系良好，方法的回收率在86-112%之间，日内相对标准偏差为5.50-8.86%，日间相对标准偏差为8.39-17.6%，满足小鼠体内S-构型利伐沙班及R-构型利伐沙班药物浓度检测分析的要求。

主权项

一种液质联用定量检测小鼠体内S‑构型利伐沙班及R‑构型利伐沙班药物浓度的方法，其特征在于具体包括如下步骤： （1）、样品预处理采用液液萃取的方法，以二氯甲烷作萃取剂，取50μL小鼠血浆样品，加150μL二氯甲烷，涡旋震荡10s,以10000r/min转速，离心分离10min,用移液枪移取下层清液于1.5mL离心管中，用N₂吹干，用50μL乙腈超声溶解后进液质分析；（2）、液相分析方法所用的仪器，高效液相色谱仪为Waters公司的ACQUITY UPLC；液相色谱柱：CHIRALPAK IC 250mm*4.6mm 5μm；流动相：按体积百分比计算，由乙腈：水：甲酸为97%:3%:0.1%的比例组成的混合溶剂，单通道等度洗脱；流速：0.9mL/min；柱温：室温；进样量：20μL；检测波长：全波段扫描；采用柱后分流的方法，液相流速为0.9mL/min,进质谱流速为0.3mL/min；（3）、质谱分析方法所用的仪器，质谱仪为Waters公司的Quattro Premier XE，采用高纯液氮经汽化所得的氮气作为碰撞气、雾化气、辅助气、锥孔气，并维持系统的真空状态；质谱过程控制参数如下：采用ESI正离子扫描模式进行多反应监测，锥孔电压35.0V；毛细管电压3.28kv；离子源温度115℃；去溶剂温度400℃；去溶剂气流量600L/hr；锥孔气流量50L/hr，定量离子对为436.0/144.9；（4）、采用外标法定量，使用峰面积计算出血浆中S‑构型利伐沙班及R‑构型利伐沙班药物浓度。