[发明专利]检测山药块茎内源激素的超高效液相色谱-串联质谱法

摘要

本发明公开了一种检测山药块茎内源激素的超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS），包括：山药块茎鲜样经冷冻干燥机脱水冻干，粉碎后加入溶剂提取，获得粗提取液经浓缩干燥，磷酸盐缓冲液复溶，置于–40℃下冷冻，解冻后离心去杂质；进行乙酸乙酯萃取3次，收集酯相；再调水相pH为2.8～3.5，乙酸乙酯再萃取3次，收集合并酯相，浓缩蒸干后甲醇复溶，得到检测样品；采用UPLC-MS/MS对检测样品进行分析。本方法前处理过程快速简便，激素提取回收率高，UPLC-MS/MS法检测限低，精度高，线性关系良好，可以同时有效提取和定量检测山药块茎中的含量甚微的五大类激素中的7种激素。

主权项

一种检测山药块茎内源激素的超高效液相色谱‑串联质谱法，其特征在于：本方法包括以下步骤：(1)粗提：山药块茎鲜样经冷冻干燥机脱水冻干，粉碎后加入溶剂提取，离心后获得上清液，再加入溶剂重复提取2次，合并内源激素的粗提取液，并浓缩干燥；(2)纯化：采用pH8～8.3、浓度为0.07mol/L的磷酸盐缓冲液对步骤(1)中的粗提取干燥物进行超声复溶，冷冻离心去杂，得上清液；乙酸乙酯萃取3次，收集酯相；再调水相pH为2.8～3.5，乙酸乙酯萃取3次，收集合并酯相，浓缩干燥，然后用100％甲醇复溶，得到检测样品；(3)检测：利用超高效液相色谱电喷雾串联质谱对检测样品进行分析，检测山药块茎中内源激素的种类和含量；其中，所述的溶剂为预冷的含有2mmol/L抗氧化剂2，6‑二叔丁基对甲酚(BHT)的100％甲醇。