[发明专利]一种牛奶凤梨快速繁殖培养方法

摘要

一种牛奶凤梨快速繁殖培养方法，包括以下步骤，步骤一：培养基选择；步骤二：外植体诱导；步骤三：继代培养；步骤四：幼苗转入；步骤五：幼苗培养；培养基选择改良MS基本培养基，其中含有3800mg硝酸钾、3300mg硫酸铵、170mg磷酸二氢钾、185mg硫酸镁、440mg氯化钙、0.83mg碘化钾、6.2mg硼酸、22.3mg硫酸锰、8.6mg硫酸锌、0.25mg钼酸钠、0.025mg硫酸铜、0.025mg氯化钴、100mg肌醇、0.1mg盐酸硫胺素、0.5mg盐酸吡哆醇、0.5mg烟酸、37.3mg乙二胺四乙酸二钠和27.8mg硫酸亚铁；该方法得到牛奶凤梨再生植株且平均根数7，株移栽成活率近100％且无表型变异；研究发现，继代近30代未发现有变异苗出现，说明只要培养基以及激素浓度配合使用恰当，可以高代培养。

主权项

一种牛奶凤梨快速繁殖培养方法，包括以下步骤，步骤一：培养基选择；步骤二：外植体诱导；步骤三：继代培养；步骤四：幼苗转入；步骤五：幼苗培养；其特征在于：在步骤一中：改良MS基本培养基中含有3800mg硝酸钾、3300mg硫酸铵、170mg磷酸二氢钾、185mg硫酸镁、440mg氯化钙、0.83mg碘化钾、6.2mg硼酸、22.3mg硫酸锰、8.6mg硫酸锌、0.25mg钼酸钠、0.025mg硫酸铜、0.025mg氯化钴、100mg肌醇、0.1mg盐酸硫胺素、0.5mg盐酸吡哆醇、0.5mg烟酸、37.3mg乙二胺四乙酸二钠和27.8mg硫酸亚铁；在步骤二中：外植体诱导培养基为：1/2MS基本培养基+6‑苄基腺嘌呤0.5～1.5mg/l+糖30g/l+萘乙酸0.5～1.5mg/l+琼脂6.5g/l，pH5.6～5.8；在步骤三中：在改良MS培养基+6‑苄基腺嘌呤2mg/l+糖30g/l+萘乙酸0.5～1.5mg/l+琼脂6.5g；不定芽的大量形成，增值7倍以上；在步骤四：当芽生长2‑3cm长的苗转入壮苗生根培养基为改良1/2MS培养基+6‑苄基腺嘌呤0.5mg/l+吲哚丁酸0.5mg/l+0.1％天然附加物+0.1％活性炭；在步骤五中：选择苗壮效果好，植株矮壮，叶色浓绿，根多且粗壮的外植体作为幼苗移植的对象，进行移植；将灭菌的牛奶凤梨幼嫩茎端切割后做为外植体，在无菌条件下将外植体接种于不定芽诱导培养基上，培养20天时诱导出不定芽，继续培养10天；然后在无菌条件下将不定芽切割后接种于增殖培养基上培养30天；再在无菌条件下将增殖培养后的不定芽转接于生根培养基上培养20天，获得牛奶凤梨组培苗；以上培养条件均为：温度25±2℃，12h光照与12h黑暗交替培养，光照强度为1800～2000Lux；待所述组培苗长至4cm～5cm高，根系较多时，可以将苗移栽出来。打开瓶塞炼苗3～5天后，洗去根部琼脂，再移栽到素沙与草炭的质量比为2∶1的栽培介质中，株移栽成活率近100％且无表型变异。