[发明专利]植物叶片总RNA提取方法

摘要

本发明属于分子生物学领域，特别涉及一种富含多糖多酚的植物叶片总RNA提取方法。植物材料经液氮研磨后，经连续两次裂解，水饱和酚与氯仿混合溶液抽提，异丙醇沉淀得到总RNA。本发明的有益效果在于：1、连续两次裂解，有效克服多糖、多酚、次生代谢物对RNA提取过程的影响，2、无需水浴，减少RNase污染，3、无需使用低温离心机，操作方便，4、本方法有效避免传统沉淀方法中LiCl残留对下游实验的影响，所提取的RNA可以满足反转录PCR和实时荧光定量PCR等后续分子生物学实验。

主权项

1.植物叶片总RNA提取方法，其特征在于：（1）植物叶片在液氮环境下研磨成细粉状，快速转移到含有细胞裂解液I的离心管中，混匀后加入盐‑醇溶液混匀后，冰上静置10分钟，离心；（2）转移上清液到含有细胞裂解液II的离心管中，混匀后加入盐‑醇溶液混匀后，冰上静置10分钟，离心；（3）转移上清液到新离心管中，经等体积的水饱和酚与氯仿组成的混合试剂抽提后，冰上静置10分钟，离心；（4）取上清液，加入异丙醇沉淀，冰上静置10分钟，离心，加DEPC水溶解总核酸，再用DNA酶I溶液消化DNA；（5）经等体积氯仿抽提，冰上静置10分钟，离心；（6）转上清液到新的离心管，加入异丙醇沉淀，冰上静置10分钟，离心；（7）用醇洗涤，再经空气干燥后，溶解在DEPC水中低温保存，其中所述细胞裂解液I为以下配方的水溶液：2 w/v% CTAB，3 w/v% PVP，0.1 mol/L Tris‑HCl，pH 8.0和25 mmol/L EDTA，pH 8.0；所述细胞裂解液II为以下配方的水溶液：2 w/v% SDS，2 w/v% PVP，25 mmol/L EDTA，pH 8.0和0.1 mol/L Tris‑HCl，pH 8.0，细胞裂解液I和细胞裂解液II都调至pH 8.0；并且所述盐‑醇溶液为含有裂解液体积1/20‑1/10的β‑巯基乙醇、裂解液体积1/4‑1/2的无水乙醇和裂解液体积1/4‑1/2的3mol/L NaAc的水溶液；其中所述提取方法无需使用低温离心机，并且离心的转速为12,000 rpm，时间5分钟；其中所述细胞裂解液I和细胞裂解液II以500‑800 μl细胞裂解液/0.1‑0.3 g植物叶片的量加入。