[发明专利]一种快速检测多穗柯主要活性成分的HPLC方法

摘要

本发明公开了一种快速检测多穗柯主要活性成分的HPLC方法，包括测定样品处理、提取测定样品、制备标准样品和检测工序，选取60目和120目之间的多穗柯叶粉为原料样品，用甲醇水溶液超声提取，重复提取4次，合并上清液，取上清液用0.45μm微孔滤膜过滤，滤液用高效液相色谱仪进行分析测定，HPLC的流动相为乙腈和体积百分含量0.02-0.06%的甲酸水溶液的体积比为26-30∶70-74等度洗脱，流速为0.7-0.9mL·min^-1，检测波长：285nm。本方法能直观快速评价野生多穗柯的质量，为多穗柯优良品的选择并对其定向培育提供科学依据。

主权项

一种快速检测多穗柯主要活性成分的HPLC方法，其特征是：包括测定样品处理、提取测定样品、制备标准样品和检测工序，操作步骤如下：（1）测定样品处理将多穗柯叶干燥、粉碎，过筛，取检验筛中间部分为待测多穗柯叶原料样品；（2）提取测定样品多穗柯主要活性成分测定样品的提取，采用甲醇为溶剂，提取方法为：精确称取多穗柯原料样品，置于离心管中，加入甲醇溶液，涡旋震荡后超声提取，离心，用滴管将上清液转移至容量瓶中，重复提取4次，合并上清液，用甲醇定容，摇匀；取上清液用0.45 μm微孔滤膜过滤，滤液用高效液相色谱仪进行分析测定；（3）制备标准样品将含量高且具有重要生物活性的根皮苷和三叶苷作为标准样品，分别精确称取真空干燥至恒重的根皮苷和三叶苷各5.00 mg，一起定容于5 mL甲醇中，配得标准品混合溶液，供测定用；（4）检测测定样品和标准样品同时检测，检测采用HPLC色谱柱：Athena C18‑WP（100Å，2.1 mm× 100 mm，3 μm），柱温：室温，选择流动相等度洗脱，选择测定波长后检测；（5）根皮苷和三叶苷测定方法的建立取不同体积的标准样品混合溶液按照色谱条件进行测定，以每个浓度下的标准溶液所得的峰面积值为纵坐标，以进样量为横坐标，建立标准曲线，计算回归方程；按照色谱条件进行测定样品的测定，根据测定样品所得的峰面积值，计算测定样品中根皮苷和三叶苷的含量。