[发明专利]一种筛选调控特定基因mRNA的miRNAs的方法无效
| 申请号： | 201410327898.3 | 申请日： | 2014-07-11 |
| 公开（公告）号： | CN104099322A | 公开（公告）日： | 2014-10-15 |
| 发明（设计）人： | 向双林;张健;魏科;颜峰;丁小凤;胡翔 | 申请（专利权）人： | 湖南师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 长沙永星专利商标事务所 43001 | 代理人： | 周咏;林毓俊 |
| 地址： | 410081 湖*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 本发明建立了一种基于生物素标记的筛选调控特定基因mRNA的miRNAs的方法。本发明将目的基因的3’UTR序列克隆到EGFP荧光载体下游，生物信息学分析预测EGFPmRNA的二级结构和设计互补的反义链DNA，并进行3’端生物素标记，利用生物素和链霉亲和素之间的强亲和力将与目的基因mRNA结合在一起的所有miRNA进行分离和纯化。该方法可以分离纯化出调控特定基因mRNA的所有miRNAs，并且可以应用到所有目的基因的mRNA，避免重复设计和合成生物素标记的反义链寡核苷酸链。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 筛选 调控 特定 基因 mrna mirnas 方法 | ||
【主权项】：
一种筛选调控特定基因mRNA的miRNAs的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）构建含目的基因mRNA的3'UTR序列和EGFP的荧光载体；（2）生物信息学分析预测EGFP mRNA的二级结构，设计EGFP mRNA的反义DNA寡核苷酸链，并进行3’ 端生物素标记；（3）将步骤（1）构建的载体转染细胞并培养，利用甲醛将mRNA和与之结合的miRNAs、蛋白交联在一起；（4）加入步骤（2）生物素标记的反义DNA寡核苷酸链，将与目的基因mRNA结合在一起的所有miRNA进行Streptavidin‑Biotin亲和沉淀分离纯化。
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