[发明专利]一种体外诱导记忆性B细胞转化为浆细胞的制备方法

摘要

一种体外诱导记忆性B细胞转化为浆细胞的制备方法,本发明是利用含CpG2006、IL-2、IL-10、B95-8细胞培养上清及胎牛血清的RPMI-1640培养基，诱导从血液中分离的记忆性B细胞分化成为浆细胞，从而分泌出RSV特异性抗体的方法，这些抗体包括过去感染过RSV，但随着时间衰减而血清学监测不到的抗体。本发明相较于其他B细胞诱导技术，本发明需要细胞数量少，诱导效率高，针对性强。

主权项

一种体外诱导记忆性B细胞转化为浆细胞的制备方法，其特征是：（1） 饲养细胞的制备与保存：采集人的新鲜抗凝血，用淋巴细胞分离液分离出人的外周血淋巴细胞，经过⁶⁰Co辐照后使人外周血淋巴细胞丧失增殖能力，从而作为人记忆性B细胞培养的饲养层细胞；（2） 诱导液的配置：按加入成分占终产物的质量体积比或体积百分比加入如下成分：2.5μg/mL的CpG2006，10ng/mL的IL‑2，10ng/mL的IL‑10, 体积百分比25%的B95‑8细胞培养上清，体积百分比10%的胎牛血清，将以上成分加入到RPMI‑1640培养基中，混匀；（3） 记忆性B细胞的诱导：将新鲜肝素钠抗凝全血样本用人淋巴细胞分离液分离，获得人外周血单个核细胞，再用人记忆性B细胞磁珠分选试剂盒分离获得记忆性B细胞，计数后，按照200细胞/孔的密度接种到96孔U型底培养板，每孔加入200mL的培养液和50000个饲养细胞，在37℃,5%CO₂条件下培养两周，让记忆性B细胞活化成为浆细胞；（4.）浆细胞阳性孔的筛选：收集步骤（3）中的细胞培养上清，使用呼吸道合胞病毒抗原G蛋白和F蛋白包被的酶标板，采用酶联免疫吸附测定方法检测B细胞上清特异性，看是否分泌所需蛋白。