[发明专利]一种快速分离乳腺癌原代肿瘤活细胞方法

摘要

本发明属于细胞分离技术领域，涉及高纯度批量乳腺癌原代肿瘤活细胞快速分离方法。本发明方法包括：获得离体的乳腺癌新鲜的组织样品，组织样品前处理和质控，高纯度批量乳腺癌原代肿瘤活细胞快速分离，批量快速分离高纯度乳腺癌原代肿瘤活细胞，本方法从乳腺癌组织块中分离活的乳腺癌细胞，肿瘤细胞纯度达90%以上。分离的乳腺癌原代肿瘤活细胞可用于药敏试验。本方法克服了现有技术原代乳腺癌细胞分离纯度低且极易受成纤维细胞污染等缺陷，能为临床药敏试验提供可靠的研究对象，为原代肿瘤细胞DNA、RNA和蛋白的建库以及为肿瘤在体研究提供新的方法和更广阔的材料来源。

主权项

1.一种快速分离乳腺癌原代肿瘤活细胞方法，其特征在于，其包括：获得离体的乳腺癌患者新鲜的组织样品；组织样品前处理和质控；高纯度批量乳腺癌原代肿瘤活细胞快速分离；通过下述步骤：1）取离体的新鲜的乳腺癌组织标本进行前处理，由所述组织标本非坏死区域且含肿瘤组织多的区域，切取1cm3大小组织块；2）同时，将前处理获取的组织块做冰冻切片和HE染色做质量控制，以保证肿瘤细胞含量达到75%以上；3）将上述2）的组织块切制成1mm3大小的组织碎片；4）用10ml含有庆大霉素的199培养液清洗组织两遍，并在两次清洗过程中均反复吹打2分钟；5）将上述步骤所述含组织的10ml的199培养液移至15ml离心管中并静置1分钟；6）移出上清至另一个干净的15ml离心管中，避免吸取底部的组织块；7）将上述步骤获取的上清按1000RPM的速度离心5分钟，并弃去上清；8）用10ml的Ham’s F‑12培养液重悬步骤7）获得的细胞沉淀，所述的Ham’s F‑12培养液中含5%FBS，1μg/ml胰岛素和1μg/ml氢化可的松；9）将上步骤获得的细胞移至培养皿或96孔板中，在37oC，9% CO2的环境下培养；10）显微镜观察所获得的细胞，并拍照；11）分离第二天换液，之后每隔三天换一次培养液。