[发明专利]鱼鳃细胞系的建立方法在审
| 申请号： | 201410133077.6 | 申请日： | 2014-04-04 |
| 公开（公告）号： | CN103937736A | 公开（公告）日： | 2014-07-23 |
| 发明（设计）人： | 曹谨玲;陈剑杰;罗永巨;王俊东;李宏全;宋晶 | 申请（专利权）人： | 山西农业大学 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071;C12R1/91 |
| 代理公司： | 太原华弈知识产权代理事务所 14108 | 代理人： | 李毅 |
| 地址： | 030801 *** | 国省代码： | 山西;14 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种鱼鳃细胞系的建立方法，包括用抗生素水在室温下处理暂养的健康鱼类，用冰水将鱼体麻醉后浸入5%二氯乙醚消毒5min，再用70%乙醇棉球对鱼体表面进行灭菌处理，然后在超净台内将鳃组织切成0.8-1.51mm3的小块，用含有抗生素的Leibovitz’sL-15培养基冲洗3次，接种到含有5mLLeibovitz’sL-15完全培养基的25cm2细胞培养瓶中，放入温度为28°C的培养箱中培养，每隔3-4d换1次完全培养基液；当鳃组织细胞达到95%融合时，按照标准的胰蛋白酶消化方法，以1:2的比例分瓶传代培养，如此传代培养至50代，便建立起鱼鳃细胞系。本发明方法使难于培养的鱼鳃细胞得到了顺利培养，能在体外稳定生长并建系成功，可传代超过50代，并能稳定增殖，成为无限细胞系。 | ||
| 搜索关键词： | 细胞系 建立 方法 | ||
【主权项】：
鱼鳃细胞系的建立方法，包括如下步骤：（1）用含500 IU/mL青霉素和500 μg/mL链霉素的抗生素水在室温下处理暂养的健康鱼类；（2）将（1）处理的鱼体用冰水麻醉后，浸入5%的二氯乙醚消毒5 min，然后用70%乙醇的棉球对鱼体表面进行灭菌处理；（3）将（2）处理的鱼体放在超净台内，在无菌条件下将鳃组织切成0.8‑1.51 mm3的小块，然后用含有抗生素的Leibovitz’s L‑15培养基冲洗3次；（4）将（3）获得的组织片段接种到含有5 mL Leibovitz’s L‑15完全培养基的25 cm2细胞培养瓶中，放入温度为28°C的培养箱中培养，每隔3 ‑4 d换1次完全培养基液；（5）当（4）的组织细胞达到95%融合时，按照标准的胰蛋白酶消化方法，以1:2的比例分瓶传代培养，如此传代培养至50代，便建立起鱼鳃细胞系。
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