[发明专利]一种杭白菊组织培养及繁殖的方法

摘要

本发明公开了一种杭白菊的组织培养和离体快速繁殖的方法，使得在短期内可以获得大量的优质杭白菊种苗，满足市场的需要；所述方法分为无菌材料的获得及诱导培养、芽的增殖和生根、壮苗培养和生根苗移栽；本发明以腋芽为外植体，应用组织培养的方法进行快速繁殖，克服了杭白菊常规扦插和分株繁殖周期长、繁殖系数低、易感染和传播病毒等缺点；用该方法生产出来的组培苗具有病毒少、遗传性稳定等优点。

主权项

一种杭白菊组织培养及繁殖方法，其特征在于所述方法按如下步骤进行：（1）无菌材料的获得及诱导培养：切取长势良好、无病虫害的杭白菊幼嫩的腋芽，用自来水冲洗0.5～2h，然后在体积浓度为1%洗洁精的水溶液中振摇2～5mins，用无菌水冲净；在超净工作台上用体积浓度70～75%乙醇水溶液浸泡30～60s，然后用混合消毒液浸泡10～20mins，再用无菌水冲洗3～5遍；在灭菌的滤纸上吸干水分，剥取0.3～0.6mm的腋芽尖，然后将腋芽尖接种到装丛生芽诱导培养基的培养瓶中，盖上瓶盖并用封口膜封住瓶口，置于培养箱中，在24～26℃，光照1500～2500lx条件下培养15～25天；所述混合消毒液为体积比1：200的吐温20和84消毒液的混合液；所述丛生芽诱导培养基为添加6‑BA1.0～3.0mg/L、NAA0.05～0.5mg/L和谷氨酰胺80～120mg/L的MS基本培养基；（2）芽的增殖和生根：观察步骤（1）所述24～26℃，光照1500～2500lx条件下培养5～15天后，切口部位出现绿色突起，20～40天后出现丛生芽，再培养10～20天，当丛生芽长到2～4cm时，将丛生芽切下转接到芽增殖培养基中，在24～26℃，光照1500～2500lx条件下进行增殖培养，获得丛生苗，再培养6～10天，丛生苗长出2～5条根系，完成芽增殖和生根，形成完整植株；所述芽增殖培养基为添加6‑BA0.5～2.0mg/L、NAA0.05～0.2mg/L、谷氨酰胺80～120mg/L和马铃薯提取物80g/L～120g/L的MS基本培养基；所述马铃薯提取物是将马铃薯洗净，去皮，称取马铃薯80～120克，切成2×2cm³的小块，放入500ml去离子水中，煮沸15～25mins，冷却至50～60℃后，用双层纱布过滤，滤液添加到MS基本培养基中，即为在MS基本培养基中添加80g/L～120g/L马铃薯提取物；（3）壮苗培养：将生根的丛生苗接入1/2MS固体培养基中，在24～26℃，光照1500～2500lx条件下进行壮苗培养，获得叶片舒展、叶色浓绿，根系粗壮，苗高3～5cm的小苗；（4）生根苗移栽：打开瓶盖炼苗2～4天后，将小苗植株上的琼脂和杂物洗净，移栽至消毒后的育苗基质上，浇透水，盖上薄膜，保持湿度80%以上，置通风阴凉处，在24～26℃、光照1500～2500lx条件下培养8～12d，杭白菊叶色浓绿，茎正常挺立，实现杭白菊的繁殖；所述育苗基质为细沙、腐殖土与谷糠灰按照质量比5：2：2的比例配制而成，所述育苗基质的消毒方法为：采用体积浓度0.5%福尔马林水溶液均匀喷洒基质，塑料薄膜覆盖3～5天后揭开薄膜再曝晒基质1～3天，完成对育苗基质的消毒，或者采用体积浓度0.5%福尔马林水溶液均匀喷洒基质，塑料薄膜覆盖3～5天后揭开薄膜再在60℃下干燥2天，完成对育苗基质的消毒。