[发明专利]一种克隆牦牛eVEGF120基因编码区全序列的方法在审
| 申请号： | 201410124048.3 | 申请日： | 2014-03-28 |
| 公开（公告）号： | CN103898097A | 公开（公告）日： | 2014-07-02 |
| 发明（设计）人： | 梁春年;吴晓云;阎萍;丁学智;包鹏甲;郭宪;王宏博;裴杰;褚敏 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京方圆嘉禾知识产权代理有限公司 11385 | 代理人： | 董芙蓉 |
| 地址： | 730050 甘肃*** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种克隆牦牛eVEGF120基因编码区全序列的方法，通过从牦牛的肝组织中提取总RNA，然后将其反转录成cDNA，通过设计的特定引物，以cDNA为模板扩增eVEGF120基因合成目的基因片段，将目的基因片段与载体连接，挑取阳性菌落进行测序直接获取eVEGF120基因片段全序列。与传统方法相比，本发明的方法具有目的片段长度明确，实验工作量小、成本低的特点。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 克隆 牦牛 evegf120 基因 编码 序列 方法 | ||
【主权项】：
一种克隆牦牛eVEGF120基因编码区全序列的方法，其特征在于包括下述步骤：1)从牦牛肝组织中提取总RNA，将总RNA反转录成cDNA；2)以步骤1)的cDNA作为模板，采用下述引物进行PCR：上游引物P1：5‘‑ATGAACTTTCTGCTCTCTTGGGTACA‑3’；下游引物P2：5‘‑TGGGTAGTTCTGTGTCAGTCTTTCC‑3’；3)回收和纯化上述PCR产物，获得目的基因片段；4)将目的基因片段与pMD‑19T载体连接加入到DH5α感受态细胞中进行转化培养，筛选其中的阳性菌落进行培养，以菌液为模板进行PCR即得eVEGF120基因片段全序列。
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