[发明专利]一种通过乌司他丁亲和层析介质制备纯品乌司他丁的方法

摘要

本发明涉及一种通过乌司他丁亲和层析介质制备纯品乌司他丁的方法。此层析介质由乌司他丁亲和配体和普通层析介质连接而成。其亲和配体为聚赖氨酸3000，普通层析介质是sephadex，亲和配体和层析介质通过亲水间隔臂进行连接。然后利用上述的亲和层析介质对乌司他丁进行纯化生产。通过调整各种溶液的浓度、pH值，洗涤、洗脱的流速等工艺，从原料中快速分离纯化分子量为37-43kDa的乌司他丁。整个过程只需要经过一步亲和层析，纯化得到的乌司他丁纯品，其收率大于80%，比活大于5000IU/mg.pr。整个纯化步骤消耗时间短，活性回收率及比活较高，适于大规模推广应用。

主权项

一种通过乌司他丁亲和层析介质制备纯品乌司他丁的方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：第一方面，一种乌司他丁亲和层析介质的合成方法，其合成方法如下：（1）活化：取亲和层析介质sephadex,先用10‑12倍纯水洗涤，过滤抽干；再加入活化缓冲液A，在40‑45℃下搅拌2.5‑3.5h，然后过滤，再用纯化水洗涤后过滤抽干；（2）亲水间隔臂的连接：活化后的亲和层析介质sephadex加含5%‑10%的1，3‑二氨基‑2‑羟基丙烷的水溶液，而后在加热至60‑70℃后搅拌，再用纯化水洗涤后过滤抽干；（3）疏水间隔臂的连接：加三聚氯嗪的水‑丙酮溶液，通过氢氧化钠调pH值至7.5‑8.5，冷却至4‑8℃搅拌，再用纯化水洗涤，过滤抽干；（4）连接上亲和配体：加聚赖氨酸水溶液，搅拌，调pH值至9‑10，用纯化水洗涤，过滤抽干即可；第二方面，制备纯化的乌司他丁，其制备方法如下：（1）取乌司他丁亲和层析介质，装柱，用PH值为7.0‑8.0的磷酸盐缓冲液冲洗平衡亲和层析介质；（2）将含有乌司他丁粗品，加入2‑3倍的水溶液进行解析，然后过滤、将溶液浓缩至3.5‑4.5L，取浓缩液；（3）将上述（2）的浓缩液通过乌司他丁亲和介质进行吸附，然后采用pH值为7.0‑8.0洗脱缓冲液B冲洗亲和介质，用以洗涤杂质；（4）最后用PH值为7.5‑9.5的洗脱缓冲液Ｃ洗脱亲和介质上吸附的乌司他丁，收集纯化后的乌司他丁溶液，浓缩、冷冻干燥即得。