[发明专利]一种蛇床子中主要成分含量测定的HPLC方法

摘要

本发明涉及一种蛇床子药材中花椒毒素、异虎耳草素、欧前胡素和蛇床子素含量测定方法，包括：分别制备花椒毒素对照品溶液、异虎耳草素对照品溶液、欧前胡素对照品溶液、蛇床子素对照品溶液和制备蛇床子提取物供试品溶液。色谱柱：Agilent-C18（250mm×4.6mm，5µm）；流动相：乙腈—磷酸缓冲盐溶液（pH=3.5），梯度洗脱；检测温度：40℃；流速：1.0ml/min；检测器：紫外检测器；分别在250nm和324nm波长下测定对照品溶液和供试品溶液并记录色谱图。该方法具有检测灵敏度高，准确可靠，分离效果好，分析简便快捷等技术特点。

主权项

一种蛇床子药材中主要成分含量测定的高效液相色谱(HPLC)方法，其特征在于以60~75%的乙醇作为溶剂，从中药材蛇床子中提取主要成分，分别制备花椒毒素对照品溶液、异虎耳草素对照品溶液、欧前胡素对照品溶液、蛇床子素对照品溶液和制备蛇床子提取物供试品溶液；利用HPLC法在双波长下同时检测蛇床子提取物中花椒毒素、异虎耳草素、欧前胡素和蛇床子素的含量；色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充物，以乙腈为流动相A，磷酸缓冲盐溶液（pH=3.5）为流动相B，梯度洗脱程序为：时间0→5min→20min→40min→55min；溶液A：95%→95%→65%→0%→95%；溶液B：5%→5%→35%→100%→5%；柱温25℃~40℃；体积流量0.8~1.5ml/min；检测波长为250nm和324nm，进样量1µl~15µl；理论塔板数按蛇床子素峰计算不得低于3000；对照品溶液的制备：分别取花椒毒素对照品、异虎耳草素对照品、欧前胡素对照品和蛇床子素对照品适量，精密称定，加甲醇适量，分别配置成浓度为50、50、800、2000µg/ml的对照品溶液；供试品溶液的制备：取蛇床子药材粉末约10g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，精密量取60~75%的乙醇50ml，密塞，称重，摇匀，超声波提取30~40min，放冷，滤过，收集滤液，同法操作2次，合并滤液，置100ml容量瓶中，再用60~75%的乙醇定容，摇匀，微孔滤膜（0.45µm）滤过，即得；测定法：分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，记录色谱图，测定，即得。