[发明专利]一种绿风藤茶品种复壮的快速繁殖方法

摘要

本发明公开了一种绿风藤茶品种复壮的组培快速繁殖方法，其步骤：A)外植体的选取与灭菌：取绿风藤茶幼嫩枝条的茎尖，经表面灭菌后备用；B）将灭菌后的绿风藤茶幼嫩枝条的茎尖进行初代培养：在无菌条件下将经表面灭菌后的外植体接种在初代培养基中，转接到诱导分化丛芽的培养基中；C)增殖培养：在无菌条件下将丛芽切成单株接入增殖培养基中进行增殖培养；D)壮苗培养；E)生根培养：将壮苗培养的丛生苗切成单株后，接种在生根培养基中进行生根培养；F)移栽：将生根组培苗移栽于基质中，培育1~2个月至成苗。方法易行，操作简便，有效地防止了外植体接种污染率，接种成功率达85%以上，生根整齐，苗壮，成活率高，适用于绿风藤茶苗的商业生产。

主权项

一种绿风藤茶品种复壮的组培快速繁殖方法，其步骤是：A) 外植体的选取与灭菌：取绿风藤茶幼嫩枝条的茎尖，经表面灭菌后备用，外植体的选取与灭菌为当年新萌发嫩枝的茎尖，剪掉嫩枝的叶片和卷须，切成长0.4‑0.6cm带顶芽茎段，用洗洁精浸泡5~10 min后，刷洗干净，流水冲洗2‑4h，移至超净工作台上，用70%体积比的酒精震荡清洗28‑32S，无菌水洗2‑4次，再放入质量与体积之比为0.1%的升汞溶液中震荡消毒6‑8min，无菌水冲洗4‑6次后，在解剖镜下切下0.4‑0.6mm的茎尖，接种到初代培养基上；B）将灭菌后的绿风藤茶幼嫩枝条的茎尖进行初代培养：在无菌条件下将经表面灭菌后的外植体接种在初代培养基中，培养15~20d后，转接到诱导分化丛芽的培养基中；所述的初代培养基：WPM+6‑BA1.5mg.L^‑1+NAA0.2mg.L^‑1+PVP2g.L^‑1 +25g.L^‑1蔗糖；或 MS+6‑BA1.5 mg.L^‑1+NAA0.2 mg.L^‑1+ PVP2g.L^‑1+25g.L^‑1蔗糖；C)增殖培养：在无菌条件下将丛芽切成单株接入增殖培养基中进行增殖培养，培养30~45天丛生芽可增殖出5~8倍；根据对幼苗数量，每隔30~45d按同样方法进行幼苗再增殖培养；诱导丛生芽和芽增殖的培养基：MS+TDZ0.2mg.L^‑1+IAA0.1mg.L^‑1+25g.L^‑1蔗糖；D)壮苗培养：初代培养和增殖培养过程中，将增殖培养的丛生芽转接到壮苗培养基中培养25~30d；所述的壮苗培养基：MS+6‑BA1.0 mg.L^‑1+NAA0.1 mg.L^‑1+25g.L^‑1蔗糖；E) 生根培养：将壮苗培养的丛生苗切成单株后，接种在生根培养基中进行生根培养，培养20~30d后，幼苗基部长出3~8条根；所述的生根培养基：1/2MS+ PP₃₃₃0.2 mg.L^‑1+IBA0.2mg.L^‑1+20g.L^‑1蔗糖；F) 移栽：将生根组培苗移栽于基质中，培育1~2个月至成苗，所述的移栽基质由草炭:蛭石按体积比1:3配制而成。