[发明专利]一种南极磷虾虾壳无机氟原位显示的方法

摘要

本发明公开了一种南极磷虾虾壳无机氟原位显示的方法，包括以下步骤：（一）前期准备：A.制备铝-钙黄绿素荧光染液；B.取载玻片，用无水乙醇浸泡，晾干，备用；（二）制作玻片：（1）取材：取南极磷虾胸、腹或/和尾部位的组织；（2）冷冻切片；（3）上述切片后，将切片在10～25℃下晾干；（4）染色，晾干；封片，即得可显示南极磷虾虾壳中无机氟原位的玻片，在荧光倒置显微镜下观察，可见：富氟的黄绿色荧光颗粒在甲壳内呈星点状分布；富氟的黄绿色荧光颗粒在甲壳近外侧下呈层状分布；虾壳外表突起部分富氟呈黄绿色。本发明所制玻片南极磷虾虾壳中无机氟原位显示清楚，是特别好的科研教学材料，建议推广应用。

主权项

一种南极磷虾虾壳无机氟原位显示的方法，其特征在于：包括以下步骤：（一）前期准备：A.制备铝‑钙黄绿素荧光染液：（1）制备1.00×10^‑3mol/L钙黄绿素储备液：溶剂为无氟水，配制后储存在棕色瓶中，备用；（2）制备1.00×10^‑2mol/L铝储备液：溶剂为无氟水，配制后备用；（3）制备铝‑钙黄绿素荧光染液：用无氟水将钙黄绿素储备液稀释至1.00×10^‑4mol/L，并与铝储备液以体积比5.5～6.5：4.5～5.5的比例混合均匀，用0.1mol/L的KOH溶液调节pH至8.9，室温避光静置48h后除去上清液，用pH为8.9的无氟水多次冲洗絮状沉淀，直至在荧光倒置显微镜下观察不到黄绿色荧光颗粒，然后将沉淀溶于pH为8.9的无氟水，得铝‑钙黄绿素荧光染液；B.载玻片的处理：取载玻片，用无水乙醇浸泡5～10分钟后取出，晾干，备用；（二）制作玻片：（1）取材：称取冷冻贮藏的鲜南极磷虾整虾，冷藏室自然解冻，浸入质量百分数为4%甲醛溶液24小时，再取出浸入质量百分数15%～25%蔗糖溶液至沉入底部，放入冰箱中4℃保存；取南极磷虾胸、腹或/和尾部位的组织，截取0.5～1cm长进行下一步的冷冻切片；（2）冷冻切片；（3）上述切片后，将切片在10～25℃下晾干；（4）用铝‑钙黄绿素染液20～40μL进行染色2h，晾干；滴加中性树胶40～60μL，然后加上盖玻片，封片后晾干24h，即得可显示南极磷虾虾壳中无机氟原位的玻片。