[发明专利]一种从发酵液中分离和纯化非达霉素的工艺

摘要

本发明提供了一种从发酵液中分离和纯化非达霉素的工艺，包括：放线菌桔橙指孢囊菌Dactylosporangium aurantiacum hamdenensis亚种NRRL18085菌株发酵结束后，极性有机溶剂浸提菌丝体；浸提液浓缩后过大孔吸附树脂柱，收集含有非达霉素的解析液；解析液浓缩后用有机溶剂萃取；萃取液浓缩后经正向柱层析，得到非达霉素粗品；该粗品经高压制备液相色谱设备，用含水的极性溶剂作为流动相、并添加酸或酸性盐调节pH，收集含有高纯度非达霉素的流出液；该洗脱液过聚苯乙烯微球树脂柱；洗脱液浓缩、萃取、萃取液干燥后浓缩，真空干燥，得白色粉末状非达霉素纯品。通过本发明分离提纯工艺，非达霉素的提取纯度较高，收率高；因此既适用于实验室研发，又适用于工业化大生产。

主权项

1.一种从发酵液中分离和纯化非达霉素的工艺，包括以下步骤：a.将放线菌桔橙指孢囊菌Dactylosporangium aurantiacum hamdenensis亚种NRRL 18085菌株发酵，发酵结束后，用极性有机溶剂浸提菌丝体得浸提液；b.步骤a得到的浸提液浓缩后上样至大孔吸附树脂柱，以有机溶剂和水的混合溶剂梯度洗脱，收集含有非达霉素的解析液；c.步骤b得到的解析液浓缩去除水后用有机溶剂萃取，萃取液用干燥剂干燥后，减压浓缩得浓缩物；d.步骤c得到的浓缩物过正相柱，梯度洗脱，收集含非达霉素的洗脱液，减压浓缩后得到非达霉素粗品；e.步骤d得到的粗品经高压制备液相色谱设备，用含水的极性溶剂作为流动相、并添加酸或酸性盐调节pH，收集含有高纯度非达霉素的流出液；f.步骤e得到的流出液加水降低有机溶剂含量、过聚苯乙烯微球树脂柱，先用水将步骤e得到流出液中调节pH的酸或酸性盐冲洗去除后、再用极性溶剂洗脱，收集含高纯度的非达霉素洗脱液，浓缩后、用乙酸乙酯萃取、萃取液干燥后浓缩，真空干燥，得白色粉末状非达霉素纯品；其中：在步骤a中，所用极性有机溶剂选自丙酮、丙醇或甲醇；在步骤b中，所述的大孔树脂为非极性、弱极性、中等极性大孔树脂；所用洗脱溶剂中的有机溶剂选自C1-C3醇或C3-C4酮，含量为0、20、30、50、60％或0、20、30、50、60、80％；在步骤c中，萃取用有机溶剂选自乙酸乙酯或氯仿；在步骤d中，所述正相柱填料选自硅胶或氧化铝；所用洗脱溶剂为丙酮/非极性溶剂的混合溶剂，其中所述非极性溶剂包括石油醚或C6--C12烷烃；在步骤e中，所述高压制备液相色谱柱填料为非极性、弱极性或中等极性，所述洗脱用的极性溶剂选自乙腈、甲醇或乙醇，所述酸或酸性盐选自H3PO4、NaH2PO4、NaHSO4或CH3COOH；在步骤f中，所得的非达霉素纯度在96％以上。