[发明专利]一种从蛹虫草中提取抗肿瘤活性组分的方法及其应用

摘要

本发明提供一种从蛹虫草中提取抗肿瘤活性组分的方法：蛹虫草子实体超微粉碎；得到超微粉水煮提取，沉淀再丙酮提取；取沉淀溶解后过液相色谱，洗脱试剂为100%正己烷、25%乙酸乙酯-正己烷、100%乙酸乙酯；取活性最强组分过液相色谱，洗脱试剂为100%正己烷、10%乙酸乙酯-正己烷、15%乙酸乙酯-正己烷、30%乙酸乙酯-正己烷、60%乙酸乙酯-正己烷、100%甲醇；取活性最强组分过液相色谱，洗脱试剂为乙酸乙酯～甲醇梯度洗脱；取活性最强组分过液相色谱，洗脱试剂为100%正己烷、20%二氯甲烷-正己烷、25%二氯甲烷-正己烷，取活性最强组分即目的组分。该方法重复性好，得到的活性组分可用于制备抗肿瘤药物。

主权项

一种从蛹虫草中提取抗肿瘤活性组分的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）超低温粉碎：取烘干的蛹虫草子实体为原料，放入超微粉碎机中进行超微粉碎，同时粉碎全过程用2～10℃的水作为超微破碎机内部冷却液，超微粉碎时间为5‑20min，得到超微粉；（2）溶剂提取：水煮：在超微粉中加入超纯水，超纯水的加入量为超微粉质量的8～10倍，100℃加热3～10小时进行提取，离心取沉淀，然后重复1～3次，将得到的沉淀合并，干燥，得到粗品A；丙酮沉淀：在粗品A中加入丙酮，丙酮的加入量为粗品A质量的2～4倍，室温下浸提12～36小时，离心后取沉淀，然后重复1～3次，将得到的沉淀合并，干燥，得到粗品B；（3）色谱分离：（a）取粗品B用50%乙酸乙酯‑正己烷溶液溶解至浓度为50mg/ml，然后通过制备液相色谱进行分离，洗脱方式为100%正己烷等度洗脱，25%乙酸乙酯‑正己烷溶液等度洗脱，100%乙酸乙酯等度洗脱，检测波长为260nm，得到各组分经体外抗肿瘤活性筛选后，选取活性最强的组分旋蒸浓缩后真空干燥，得到组分A；（b）取组分A用100%乙酸乙酯溶解至浓度为50mg/ml，然后通过制备液相色谱进行分离，洗脱方式为100%正己烷等度洗脱，10%乙酸乙酯‑正己烷溶液等度洗脱，15%乙酸乙酯‑正己烷溶液等度洗脱，30%乙酸乙酯‑正己烷溶液等度洗脱，60%乙酸乙酯‑正己烷溶液等度洗脱，100%甲醇等度洗脱，检测波长为260nm，得到各组分经体外抗肿瘤活性筛选后，选取活性最强的组分旋蒸浓缩后真空干燥，得到组分B；（c）取组分B用100%甲醇溶解至浓度为50mg/ml，然后通过制备液相色谱进行分离，洗脱方式为100%乙酸乙酯～100%甲醇梯度洗脱，检测波长为260nm，得到各组分经体外抗肿瘤活性筛选后，选取活性最强的组分旋蒸浓缩后真空干燥，得到组分C；（d）取组分C用20%二氯甲烷‑正己烷溶液溶解至浓度为50mg/ml，然后通过制备液相色谱进行分离，洗脱方式为100%正己烷等度洗脱，20%二氯甲烷‑正己烷溶液等度洗脱，25%二氯甲烷‑正己烷溶液等度洗脱，检测波长为260nm，得到各组分经体外抗肿瘤活性筛选后，选取活性最强的组分，旋蒸浓缩后真空干燥，即为本发明目的抗肿瘤活性组分。