[发明专利]一种二化螟血淋巴细胞的原代培养方法有效
| 申请号： | 201410030148.X | 申请日： | 2014-01-23 |
| 公开（公告）号： | CN103820380A | 公开（公告）日： | 2014-05-28 |
| 发明（设计）人： | 刘光富;俞晓平 | 申请（专利权）人： | 中国计量学院 |
| 主分类号： | C12N5/07 | 分类号： | C12N5/07 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 张法高 |
| 地址： | 310018 浙江省杭*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种二化螟血淋巴细胞的原代培养方法。包括如下步骤：（1）配制细胞原代培养液和传代培养液；（2）将二化螟幼虫浸没在乙醇溶液中，进行表面消毒，清洗吸干；（3）将虫体置于用乙醇消毒过的解剖蜡盘中，解剖二化螟；（4）将血淋巴放入盛有HBSS清洗液的细胞培养瓶，静置，待血淋巴细胞贴壁后，吸除HBSS，加入新鲜的HBSS，重复3次；（5）加入细胞原代培养液，放入无光照的细胞培养箱中培养，过夜后，再加入细胞传代培养液；（6）每隔7天吸出和换入细胞传代培养液，直至扩展并增殖的细胞充满培养瓶。本发明有助于在离体条件下研究二化螟，为其防治途径的研究和开发提供帮助。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 二化螟 淋巴细胞 培养 方法 | ||
【主权项】：
一种二化螟血淋巴细胞的原代培养方法，其特征在于，包括如下步骤： （1）配制细胞原代培养液和传代培养液；（2）在无菌条件下，将二化螟幼虫浸没在70%或75%乙醇溶液中，进行表面消毒10～20分钟，用无菌蒸馏水清洗二化螟幼虫2～3次，用无菌滤纸吸干虫体或用吹风机吹干虫体；（3）将虫体置于用70%或75%乙醇消毒过的解剖蜡盘中，用解剖针将头尾固定，解剖二化螟，用20μL移液器吸取血淋巴；（4）将血淋巴放入盛有1mL～2mL HBSS清洗液的T‑25cm2细胞培养瓶，静置15～20分钟，待血淋巴细胞贴壁后，吸除HBSS，加入新鲜的HBSS，重复3次；（5）最后1次去除HBSS后，加入细胞原代培养液1mL,放入无光照的细胞培养箱中27℃培养，过夜后，再加入2mL细胞传代培养液；（6）每隔7天吸出和换入50%～70%量的细胞传代培养液，直至扩展并增殖的细胞充满培养瓶。
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