[发明专利]一种烟草立枯病人工发病的快捷方法

摘要

本发明公开了一种烟草立枯病人工发病的快捷方法，该方法的步骤如下：1.烟草幼苗培育准备；2.接种菌丝体的准备；3.烟草幼苗接种前处置；4.接种立枯病菌；5.接种后处置。本发明的优点是：1）接种技术体系微型化，使用微小的幼苗，在很小的空间内接种发病，耗用很短的试验周期。2）实施过程简单，操作方便效率高。3）全程在普通实验室内完成，发病局部条件容易控制，受干扰小，容易实现技术方法标准化。

主权项

一种烟草立枯病人工发病的快捷方法，其特征在于，利用立枯病菌可侵染烟草叶片引起组织坏死的特性，在培养皿内接种幼小烟苗，导致烟苗叶片快速发病，表现清晰症状；方法的步骤如下：1）烟草幼苗培育准备：用普通的浅盘盛装肥力较好且疏松的土壤，用常规方法在室内培育烟苗，长至3～4片小叶片后备用；2）接种菌丝体的准备：将立枯病菌移植到PSA普通真菌培养基平板中心，PSA培养基成分为：马铃薯200克，蔗糖20克，琼脂18克，水1000mL，在28℃条件下培养至长出较大菌落，取直径为6mm打孔器在平板菌落外周打取大小一致的菌丝琼脂圆块，以此菌丝块作接种体；3）烟草幼苗接种前处置：取步骤1）育好的适用幼苗，接种前先浇水湿润软化育苗土壤，以便于拔苗，取出干净的培养皿置于普通浅方盘内，并往培养皿内加入薄层清水；选取有3～4片小叶片的幼苗，用手轻轻拔起并转到其它容器盛装的清水中，轻轻晃动洗脱幼苗根系上的土壤，将幼苗转到上述备好的培养皿内，把小叶片架放于培养皿的皿缘上，根系靠在皿底上，使幼苗呈竖立状态，并且使清水浸没根系；4）接种立枯病菌：挑取步骤2）准备的菌丝块，轻轻贴放于步骤3）处置完毕的幼苗的心叶上或心芽上；5）接种后处置：步骤4）操作完备后，将盛装接种幼苗的培养皿放在浅方盘内，并将有机玻璃罩罩在浅方盘上，往浅方盘内注入薄层清水，使有机玻璃罩内部封闭并形成罩内稳定的高湿状态；然后将整套装置放于具备日常散射光的普通室内培养，培养温度维持在25～30℃，注意避开直射阳光照晒；接种结果导致幼苗叶片出现水渍状坏死，最后整个幼苗全部坏死腐烂。通常情况下，接种1天后可见明显坏死表现，3～4天后全株腐烂。