[发明专利]使用双级切线流超滤纯化多肽

摘要

本发明涉及使用双级切线流超滤(“TFF”)从含有目的分子的溶液分离该分子的方法。特别地，本发明的方法是涉及加工粗制进料流如条件化的细胞培养上清液以在后续(即，下游)提炼单元操作之前大幅度降低污染物水平和/或杂质水平。本发明的方法可以用于加工来自生物生产系统如发酵或其他细胞培养过程的粗制进料流，并且还可以消除在对高杂质负荷敏感的下游过程如层析单元操作之前对费时的杂质沉淀(例如，pH驱动型)过程和/或沉淀物过滤过程的需要。公开的双级TFF方法联合了可以在下述pH有利实施的至少两个TFF单元操作，所述pH对应于进料流(例如，细胞培养上清液)的pH或大约是该pH，一般是pH7.5±1.0。TFF单元操作补充、改善或替代纯化进料流的目的蛋白的传统过程的用途可以代表明显的直接和间接加工成本节省。例如，除了通过消除沉淀过程和沉淀物过滤过程而间接节约之外，通过双级TFF单元操作实现的杂质荷载降低可以通过改善下游柱性能，例如，层析分离、动态结合容量、运行寿命和/或所需的柱尺寸减低导致间接节省。在具体的实施方案中，本发明的方法用于纯化免疫球蛋白分子(例如，抗体)的过程中，所述过程缺少亲和纯化步骤，例如，蛋白A亲和层析纯化。

主权项

1.一种使用双级切线流超滤(TFF)从含有目的蛋白质的细胞培养液分离所述蛋白质的方法，其中所述蛋白质具有至少10kD但是不大于500kD的分子量，其中所述双级TFF包括第一TFF单元操作和第二TFF单元操作，使用具有所述蛋白质分子量的一半(0.5倍)或更小的截留值的第一超滤膜，所述第一TFF单元操作过滤含有所述蛋白质的第一产物流，使得所述蛋白质回收于第一TFF单元操作的滞留物中；并且使用具有至少两倍(2倍)于所述蛋白质分子量但不大于1000kD的截留值的第二超滤膜，所述第二TFF单元操作过滤含有所述蛋白质的第二产物流，使得所述蛋白质回收于第二TFF单元操作的渗透物中；并且其中所述第一或所述第二产物流是细胞培养上清液。