[发明专利]一种高效生产γ‑聚谷氨酸的方法

摘要

本发明公开了一种高效生产γ‑聚谷氨酸的方法，属于生物发酵生产高分子材料技术领域。本发明以高产γ‑聚谷氨酸的地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）CGMCC NO.3336为出发菌株，向发酵培养基中添加硝酸钠并通过调控发酵过程中pH值与通风量，在硝酸盐呼吸条件下影响聚谷氨酸合成酶的活性，从而减少发酵液中谷氨酸的剩余，提高谷氨酸的转化率，发酵结束后发酵液中谷氨酸含量为5‑15g/L,γ‑聚谷氨酸产量45‑55g/L。为γ‑聚谷氨酸工业化生产提供一种经济可行的生产方法。

主权项

一种高效生产γ‑聚谷氨酸的方法，其特征在于：以地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)CGMCC NO.3336为出发菌株，通过液体深层发酵制备，包括如下步骤：(1)菌种活化：将地衣芽孢杆菌CGMCC NO.3336原始菌株接种在斜面培养基上，于37℃培养16小时，如此活化2‑3次，制备成熟的斜面种子；所述斜面培养基组成为：蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，NaCl 10g/L，琼脂20g/L，pH7.2，不足部分纯净水补足；(2)种子液的制备：将一环活化后的斜面种子接种于装有50ml液体培养基的500ml三角瓶中，37℃，220rpm培养16小时至对数生长期；所述液体培养基组成为：葡萄糖30g/L，酵母膏7g/L，胰蛋白胨10g/L，K2HPO4 0.5g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，pH7.2，不足部分纯净水补足；(3)发酵罐发酵：将步骤(2)中的种子液以10％的接种量接种于发酵罐，30L发酵罐发酵培养基装液量为15L，初始发酵温度37℃，罐压0.05Mpa，通风量1.0vvm，转速600rpm；当发酵至24h后调节转速至400rpm，通风量1.5vvm，并开始补加流加培养基，通过pH值的反馈调节流加培养基的流加速度，控制pH值在7.9至发酵结束前6小时,总发酵时间为72h；所述发酵培养基组成为：葡萄糖80g/L，酵母膏20g/L，NH4NO3 4.5g/L，MgSO4·6H2O0.5g/L，NaCl 10g/L，CaCl2·6H2O 0.5g/L，FeSO4 0.01g/L,谷氨酸钠40g/L,NaNO3 40g/L,MnSO4·H2O 0.15g/L,pH值7.5,不足部分纯净水补足；所述流加培养基组成为：葡萄糖850g/L，氯化钠60.0g/L，CaCl2·6H2O 15.0g/L，MnSO4·H2O10g/L，MgSO4·6H2O 20g/L，pH值7.9,不足部分纯净水补足。