[发明专利]一种检测食品中阪崎肠杆菌的双抗体夹心法

摘要

一种检测食品中阪崎肠杆菌的双抗体夹心法，属于免疫分析领域。本发明应用阪崎肠杆菌(ATCC29544)，及阪崎肠杆菌ATCC29544耦联BSA提取的LPS分别为免疫原同时免疫BALB/c小鼠，经免疫、融合、筛选得11株阪崎肠杆菌单抗，分别标记HRP并以阪崎肠杆菌进行两两配对。以7号单抗CGMCCNo.7207为包被抗体，8号单抗CGMCCNo.7208为酶标抗体，以ATCC29544为标准品建立了阪崎肠杆菌的夹心ELISA法，LOD为53000CFU/mL。本发明采用理化性质高那均一、特异性好、可大量制备的单抗，建立的夹心法灵敏度高，成本低，与肠炎沙门氏菌、E.coli、E.coliO157:H7、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌无交叉反应，为食品中阪崎肠杆菌的检测提供了快速高效的分析手段。

主权项

一种基于单克隆抗体的检测食品中阪崎肠杆菌的双抗体夹心法，其特征在于步骤为：（1）单克隆抗体的制备    以阪崎肠杆菌ATCC 29544菌体及耦联BSA的阪崎肠杆菌提取的LPS分别做为免疫原，同时免疫 8周龄的BALB/c小鼠，进行免疫、融合、筛选，共筛选到11个细胞株；（2）单克隆抗体的配对筛选将纯化后的11株单克隆抗体分别标记辣根过氧化物酶HRP，直接法鉴定标记成功后进行夹心法配对，配对参数如下：包被抗体2μg/mL；包被液为pH9.6、0.01M的碳酸盐缓冲液；标品浓度10^8cfu/mL；标品稀释液pH7.2、0.01M的PBS；酶标抗体稀释500倍使用，在此条件下，实验成功得到了8对P/N值>5的配对；（3）夹心法的建立选择检测限稳定、灵敏的配对，即以CGMCC No.7207为包被抗体，CGMCC No.7208为酶标抗体建立夹心法；具体参数如下：抗体包被浓度：2μg/mL，包被液：pH9.6、0.01M碳酸盐缓冲液，标品稀释液：含0.2% Tween 的pH7.2、0.01M的PBS，检测抗体浓度：2.5μg/mL，反应时间：包被、封闭：37℃，2h；标准品：37℃，1h；检测抗体37℃，1h；显色10min；优化后阪崎肠杆菌夹心法的LOD为53000 CFU/mL。