[发明专利]一种检测己烯雌酚的电化学免疫传感器的制备方法及应用

摘要

本发明提供了一种检测己烯雌酚的电化学免疫传感器。该免疫传感器利用电极表面修饰技术，将制备碳纳米管-离子液体-壳聚糖（MWCNTs-IL-CS）复合物修饰在电极表面，再滴加合成的基金纳米粒子（AuNPs）在修饰的电极表面，在修饰己烯雌酚的完全抗原DES-BSA在表面，同时修饰抗体复合物（PRGO-Au-Ab-HRP）和己烯雌酚标准品在电极表面，DES-BSA和标准品同时竞争结合抗体复合物上抗体的结合位点，改变标准品的浓度，在检测底液添加过氧化氢（H2O2）前后，通过信号变化和标准品浓度之间的关系，绘制工作曲线。可用于检测食品中的己烯雌酚。本发明的电化学免疫传感器选择性强、灵敏度高、操作简单快速，适合检测食品中的己烯雌酚。

主权项

一种检测己烯雌酚的电化学免疫传感器，其特征在于，包括以下步骤：(1) 碳纳米管‑离子液体‑壳聚糖纳米复合物(MWCNTs‑IL‑CS)和金纳米粒子的制备：50 mg的壳聚糖溶于 20 ml的1%的乙酸中，得到壳聚糖溶于，一定量的碳纳米管和粒子通过超声溶于得到的壳聚糖溶液中，得到MWCNTs‑IL‑CS；取1 ml，1%的HAuCl4·4H2O溶于99 ml水中，加入一定量的柠檬酸钠溶液，100℃回流1 h，得到AuNPs纳米粒子；(2) 抗体复合物的制备：10 mg DA和1 mg GO 溶于 10 ml pH为8.5的PBS中，超声2 min，形成均匀的分散溶；60℃搅拌24 h，得到PRGO，重新溶于10 ml水中；500 μl HAuCl4·4H2O (10 mg/mL)加如上述得到的溶液中，搅拌2 h后，再加入一定量的柠檬酸钠溶液，搅拌2 h，离心清洗，再溶于10 ml水中；最后，100 μl，1 mg/mL的HRP 和100 μl，5 μg/mL的Ab加入到2 ml上述溶液中，4℃搅拌一夜，用PBS缓冲液离心清洗，溶于2 ml含有1%BSA的PBS中备用；(3) 检测己烯雌酚免疫传感器的制备：滴加10μl的MWCNTs‑IL‑Cs在处理好的金电极表面，室温下干燥；再滴加20μl的AuNPs在修饰的电极表面，室温下干燥；再滴加一定量的己烯雌酚完全抗原DES‑BSA在修饰电极表面，室温下干燥，每一步修饰后用PBS缓冲溶液曲线电极。