[发明专利]一种担载SiO2磁珠快速提取古DNA的方法

摘要

一种担载SiO₂磁珠快速提取古DNA的方法，将处理好的骨骼样品放置在等离子体处理反应器中，对骨骼样品处理，液氮处理骨骼样品，把骨骼样品研磨成粉末，并加入其10倍体积的提取缓冲液振荡；在离心机中吸出上清液浓缩；再加入结合缓冲液和磁珠悬浮液混匀；加入洗涤缓冲液洗涤，取下离心管，加入TE洗脱液离心使磁珠被吸附，将洗脱液移至干净离心管中，即得到古DNA提取溶液；本发明在整个纯化过程不需要离心、不需要加入多种试剂，简化了古DNA提取步骤，缩短了提取时间，操作简单，成本低廉，大大提高了古DNA提取效率，降低了提取成本和对设备的依赖性。

主权项

一种担载SiO₂磁珠快速提取古DNA的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：步骤一、打磨清除骨骼表面土层和污垢后，进行紫外照射30min，波长253.7nm，然后用70%的乙醇清洗两次，去除外源微生物污染；步骤二、将骨骼样品放置在等离子体处理反应器中，采用外电极、射频功率发生器进行流动式射频放电，频率为13.56MHz，放电压强为50Pa，功率40W，放电时间1～10min；同时在等离子体处理反应器中加入Ar/O₂为9:1的等离子体对骨骼样品处理，处理后的骨骼样品从等离子体处理反应器中取出，在空气中放置10min，然后进行古DNA提取；步骤三、液氮处理骨骼样品，把骨骼样品研磨成粉末，作为古DNA提取样品；步骤四、称取古DNA提取样品0.5‑2g，并加入其10倍体积的提取缓冲液，于37℃振荡过夜，振荡速度为220r/min；过夜后的古DNA提取样品转入空气浴内振荡，于55℃继续振荡温育6h，然后于95℃放置5min，使多余的蛋白酶K失活；步骤五、将步骤四的古DNA提取样品在离心机中7500r/min离心8min吸出上清液，将上清液移入超滤离心管中，6800r/min浓缩至100μl；步骤六、在步骤五所得的100μl浓缩液中加入300μl结合缓冲液和20μl的磁珠悬浮液，颠倒混匀10min，将离心管置于磁力架1min，使磁珠吸附到侧壁，吸掉离心管内液体；步骤七、向步骤六的离心管内加入500μl洗涤缓冲液，轻柔颠倒数次，利用磁力架吸附磁珠，1min后吸掉管内液体，洗涤过程重复一次；步骤八、取下离心管，加入50～100μl的TE洗脱液，使磁珠悬浮，55℃水浴10min，将离心管置于磁力架1min，使磁珠被吸附，将洗脱液移至干净离心管中，即得到古DNA提取溶液。