[发明专利]一种单疱病毒潜伏感染细胞模型的建立及活化方法

摘要

本发明涉及一种建立单纯疱疹病毒I型（HSV-1）体外静止感染原代兔角膜基质细胞模型的方法，其特征包括如下步骤：原代兔角膜基质细胞的分离和培养，体外培养的原代兔角膜基质细胞的神经潜质诱导，HSV-1静止感染诱导后的原代兔角膜基质细胞，体外静止感染原代兔角膜基质细胞中HSV-1的活化及静止感染的HSV-1在细胞内成功活化的验证。本发明的方法的优点在于为研究单纯疱疹病毒性角膜炎潜伏和复发的机制以及研制抑制其复发的药物提供了一个经济、省时、表现均一且重现性良好的HSV-1体外静止感染细胞并可成功活化的模型。

主权项

一种单疱病毒潜伏感染细胞模型的建立方法，包括如下的步骤：1）原代兔角膜基质细胞的培养将去掉内皮的兔角膜酶解消化处理后，去掉上皮层并剪成小块，放入细胞培养液中进行培养，培养结束后，将培养的原代角膜基质细胞经细胞消化液消化后用于后续的细胞诱导分化；2）原代兔角膜基质细胞的神经潜质诱导将步骤1）制备的兔角膜基质细胞先用细胞培养液培养至细胞长至单层，然后换细胞诱导分化液对角膜基质细胞进行神经潜质诱导分化，37℃条件下诱导分化7‑10天，3‑4天换液一次；3）HSV‑1静止感染诱导原代兔角膜基质细胞HSV‑1静止感染角膜基质细胞前一天，将细胞诱导分化液换成静止感染维持液，37℃孵育24hrs，然后加入0.1‑1MOI的HSV‑1，37℃感染过夜；吸弃HSV‑1后加入新的静止感染维持液继续培养9天完成细胞模型建立。