[发明专利]一种基于拆分适配体和水溶性共轭聚合物的凝血酶检测方法

摘要

发明是一种基于拆分适配体和水溶性共轭聚合物的凝血酶检测方法，该方法利用了水溶性聚合物对DNA链构象变化敏感，以及核酸适配体具有特异性结合能力等特点，设计了一种基于水溶性共轭聚合物/核酸适配体的超分子检测平台。当溶液中不存在凝血酶或存在其他非特异性蛋白时，这两段序列不能形成G-四链体结构，复合物与聚合物的之间的距离较近，从而能与聚合物发生有效的能量转移；当溶液中存在凝血酶时，凝血酶将诱导这两段序列形成G-四链体结构，增加了复合物与聚合物的之间的距离，从而不能发生有效的能量转移。本发明方法简便、快速、具有较高的灵敏度和选择性，在凝血酶检测方面具有重要的意义。

主权项

一种基于拆分适配体和水溶性共轭聚合物的凝血酶检测方法，其特征在于该方法包括以下步骤： a） 将适配体片段1、适配体片段2和水溶性共轭聚合物按摩尔比 1：1：5~10 混合，形成适配体/聚合物的复合物，然后加入到缓冲溶液中，以404 nm为激发波长，进行荧光检测，记录该复合物的荧光发射谱带，并计算其525 nm与440 nm处荧光强度的比值I525/I440；其中，所述适配体片段1或者适配体片段2上标记有染料；b） 将适配体片段1和适配体片段2及含凝血酶的待测样品加入到结合液中进行反应，形成凝血酶/适配体复合物；c） 向步骤b) 凝血酶/适配体复合物中加入水溶性共轭聚合物，凝血酶/适配体复合物与水溶性共轭聚合物的摩尔比为0～1：5，然后加入到缓冲溶液中，以404 nm为激发波长，进行荧光检测，计算其525 nm与440 nm处荧光强度的比值I525/I440，根据I525/I440比值下降的程度实现对凝血酶的定性及定量检测； 其中：所述的适配体片段1的碱基组成为：5’‑FITC‑GGTTGGTG‑3’；适配体片段2的碱基组成为：5’‑TGGTTGG‑3’。