[发明专利]一种用于转录组测序的建鲤肌肉RNA的提取方法

摘要

发明涉及一种用于转录组测序的建鲤肌肉RNA的提取方法，尤其是一种提取纯度高、完整性好、得率高的用于转录组测序的建鲤肌肉RNA的方法，属于分子生物学技术领域。包括如下步骤：将建鲤肌肉组织在液氮中研磨成粉末，加入变性液、匀浆后，加入含有蛋白酶K的RNAse-Free的水，振荡混匀，离心取上清液，加氯仿混匀后，离心取上清液；再加入高盐溶液和异丙醇后，得到沉淀，用乙醇洗涤、干燥，即可。采用本发明方法提取的肌肉RNA得率高，并且纯度高、完整性好、可以用于转录组测序。

主权项

一种用于转录组测序的建鲤肌肉RNA的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：(1) 取建鲤肌肉组织10~50mg，投入装有液氮的研钵中，边加液氮边研磨，将组织研磨至粉末状；(2) 将粉末转移至离心管A中，向其加入400～600μl变性液，用匀浆机在冰上匀浆10~40s；(3) 向离心管A中加550～650μl DEPC水，振荡混匀；然后加5～15μl 含有蛋白酶K的RNAse‑Free的水，振荡混匀；再在50～60℃下水浴8~12min，其间需要上下颠倒离心管；(4) 室温下12000～14000 r/min离心3～7min，转移上清液到离心管B中；(5) 向离心管B中加入150～250 μl氯仿，剧烈摇动15~20s，室温静置3~5min；4℃的温度下用12000～14000 r/min离心8～12min，转移上清液到离心管C中；(6) 向离心管C中加200～300μl高盐溶液及200～300μl异丙醇，混匀，室温放置8~12min，所述的高盐溶液包括有0.8mol/L柠檬酸三钠和1.2mol/L氯化钠，溶剂是水；(7) 4℃温度下用12000～14000 r/min离心10~20min，弃上清液；(8) 沉淀用体积浓度为70～80%乙醇水溶液洗涤两次，7000~8000 rpm/min离心2~4 min，弃去上清；(9) 室温干燥沉淀2~5分钟，加15~30μl DEPC水溶解RNA，‑70~‑90℃度保存。