[发明专利]一种卵巢颗粒细胞分离提纯的方法

摘要

本发明公开了一种卵巢颗粒细胞分离提纯的方法。具体步骤为：首先将细胞沉淀物上层的白色黏液团收集至另一离心管，PBS洗涤1次后加入等体积的300IU/ml透明质酸酶，吹打混匀，室温消化1～2min，再用2倍体积含FBS的DMEM/F12培养液终止消化；余下细胞沉淀物加入3倍体积的红细胞裂解液，颠倒混匀，冰上静置。本发明的有益效果是，对颗粒细胞存活率无明显影响，更为省时高效，有助于建立稳定的颗粒细胞体外培养体系。

主权项

一种卵巢颗粒细胞分离提纯的方法，其特征在于，将细胞沉淀物上层的白色黏液团收集至另一离心管, P B S洗涤1次后加入等体积的3 0 0 IU/ml透明质酸酶,吹打混匀,室温消化1~2 min,再用2倍体积含FBS的DMEM/F12培养液终止消化；余下细胞沉淀物加入 3倍体积的红细胞裂解液,颠倒混匀,冰上静置15 min后, 400 ×g离心5 min,弃上清液,沉淀物中加入5倍体积的PBS,洗涤2次后用等体积的DMEM/F12培养液重悬细胞；将2部分细胞悬液合并混匀,小心移至等体积50% Percoll分离液的表面, 500 ×g离心20 min；离心后颗粒细胞位于上层培养液与下层Per coll分离液的界面处；用移液管小心吸取界面层颗粒细胞,加入5倍体积的PBS, 150 ×g离心3 min后弃上清；加入等体积胰酶,轻轻吹打混匀,室温消化1 min以获取单细胞悬液,用2倍体积含FBS的DMEM/F12培养液终止消化；再次用PBS洗涤细胞,去除细胞表面附着的Percoll分离液和EDTA；用含体积分数10%FBS的DMEM/F12培养液重悬细胞。