[发明专利]一种喜树愈伤组织培养和增殖的光调控方法

摘要

本发明公开了一种喜树愈伤组织培养和增殖的光调控方法，筛选出建立喜树无性系的最优培养基配方。结果表明：茎段的诱导培养基以MS+0.1mg／L KT+4mg/L2，4-D为佳；增殖培养以B5+0.5mg／L KT+1.0mg／LNAA+0.5mg／L2，4-D最优；叶片表现出较差的诱导率。将愈伤在红光、绿光、蓝光、红蓝光、白光条件下增殖，通过分析单位愈伤的增长量，得到红光、绿光对喜树愈伤的生长有促进作用，蓝光对愈伤的生长有抑制作用，白光、红蓝光的作用不明显，其中以绿光的促进作用最显著。

主权项

一种喜树愈伤组织培养和增殖的光调控方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将选取的喜树春发新梢剪切成小段，用自来水冲洗干净，用洗衣液溶液浸泡15min，流水下反复冲洗；2)用流水冲洗干净后，在75％乙醇溶液中浸1min，立即放人0.1％升汞溶液中消毒5min，无菌水冲洗5次后放在无菌滤纸上晾干备接种用；3)将叶片剪成5mm×5mm，带腋芽茎段切成2mm的小段，在无菌的条件下分别接入配制好的诱导培养基MS+0.1mg／L KT+4mg/L2，4‑D上，每配制1L培养基加入5.5g琼脂和30g蔗糖，调pH至5.9，将诱导培养基分装到培养瓶中，每瓶40mL，在121℃下灭菌15min，培养温度25±2℃，光照强度1000～1500lx，暗培养一周，再转入光照培养，每天光照时间12h；4)诱导出的愈伤组织转移至新的继代培养基上继代培养，30d继代1次，继代培养基为B5+0.5mg/L KT+1.0mg／L NAA+0.5mg／L2，4‑D，5.5g／L琼脂和30g／L蔗糖，pH为5.9；5)30d继代1次，连续继代5次后，挑选疏松易碎的愈伤组织进行LED光下培养。