[发明专利]一种高纯度鲟鱼硫酸软骨素的制备方法

摘要

本发明公开了一种从鲟鱼骨中制备高纯度硫酸软骨素的方法。利用鲟鱼头骨和脊骨为原料，经硫酸软骨素提取专用酶与碱性蛋白酶联合酶解新工艺，制得鲟鱼硫酸软骨素粗品。上述粗品经季铵盐纯化，乙醇沉淀，透析后即可制得硫酸软骨素纯品。本制备方法，可使鲟鱼硫酸软骨素产品纯度高达95%左右，葡萄糖醛酸含量高达40%左右，工艺简单，用酶量少，且鲟鱼软骨蛋白可以回收利用，因而极大的提高了经济效益。

主权项

一种高纯度鲟鱼硫酸软骨素的制备方法，其特征是，包括以下步骤： （1）预处理：以新鲜鲟鱼头骨和脊骨为原料，将其放入锅中水煮1小时，取出放冷后剔除头部、脊索软骨上残留的肌肉、脂肪和其他结缔组织，用10倍量（v/m）95%乙醇浸泡2小时，之后更换乙醇重复浸泡一遍，冷冻干燥后粉碎备用。 （2）酶解：将步骤（1）中所得鲟鱼软骨粉溶于25倍量（v/m）pH值为7的氯化钠溶液中，碳酸钠溶液pH值用12mol/L盐酸溶液调节。向溶液中加入硫酸软骨素提取专用酶进行酶解，酶解完后煮沸10分钟使酶失活，之后加入碱性蛋白酶进行酶解，酶解完后煮沸10分钟使酶失活，过滤收集酶解液。 （3）三氯乙酸除蛋白：将步骤（2）中的酶解液进行冷却，冷却至4℃后向其中加入1/19倍量（v/v）6.1mol/L三氯乙酸。静置3小时沉淀析出，之后于4℃离心15分钟收集滤液。 （4）醇沉、干燥：向步骤（3）中的滤液中加入4倍量（v/v）乙醇，于4℃离心15分钟收集沉淀，将沉淀在80℃烘干后得到鲟鱼硫酸软骨素粗品。 （5）季铵盐沉淀：将（4）中的硫酸软骨素粗品溶解于50倍量(m/m)水中，向其中加入氯化十六烷吡啶进行混合，于4℃离心15分钟收集沉淀。 （6）醇沉：将步骤（5）中的沉淀溶解于62.5倍量（v/m）2.5mol/L的氯化钠溶液中,向其中加入乙醇，于4℃离心15分钟收集沉淀。 （7）膜透析、干燥：将步骤（6）中的沉淀溶解于100倍量（v/m）水中，将溶液用截留分子量为7000Da透析袋进行透析。将透析液于‑50℃真空干燥后即得硫酸软骨素纯品。