[发明专利]一种基于自诱导仿生锆化固定化蛋白酶的方法

摘要

本发明提供了一种基于自诱导仿生锆化固定化蛋白酶的方法。利用菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶或胰蛋白酶对K2ZrF6锆前驱体仿生锆化的诱导效应，在诱导仿生锆化的过程中实现蛋白酶的固定化，获得以氧化锆为载体的固定化蛋白酶。本发明克服了现有传统固定化方法存在的固定化过程复杂、酶与载体的生物相容性差、其与载体之间的结合作用相对较弱、固定化酶的稳定性差、使用寿命低以及固定化反应条件通常较剧烈而造成酶的失活等缺陷，具有固定化过程简单、无需额外的诱导剂、条件温和、效率高、可重复利用等优点。

主权项

一种基于自诱导仿生锆化固定化蛋白酶的方法，其特征在于具体步骤为：室温下，在固定化反应器中加入8~12 mL浓度为0.01~0.05 mol/L 的锆前驱体溶液，然后加入8~24 mL用pH 6.0~8.0、浓度0.02 mol/L~0.12 mol/L的缓冲液配制的浓度为4 mg/mL~12 mg/mL 游离蛋白酶溶液，使锆前驱体溶液与游离蛋白酶溶液的体积比为1:1~2；轻轻搅拌5 min，5000 rpm冷冻离心10 min，收集沉淀；沉淀用蒸馏水洗涤3次后，冷冻干燥，得到固定化酶；所述游离蛋白酶为菠萝蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶中的一种；所述锆前驱体溶液为K2ZrF6 溶液；所述缓冲液为磷酸盐缓冲液，为磷酸二氢钠和磷酸氢二钠混合制成。