[发明专利]一种检测土壤谷氨酰胺酶活性的分析方法

摘要

本发明涉及一种检测土壤中谷氨酰胺酶活性的分析方法称取过土壤风干样品使用氯仿进行熏蒸；每份1克于n（n≥6）个硼硅酸盐试管中，其中向n/2支加入0.3‑0.5ml反应液，另外n/2支加入0.3‑0.5ml对照液；向所有试管中加谷氨酰氨溶液。试管在室温条件下使用往复振荡器振荡，加入4.0‑4.8ml终止液；静止待固体颗粒沉淀后，取上清液离心；离心后得到的上清液使用分光光度计比色；得到吸光度值，根据吸光度值和斜率，计算所测定溶液中的5‑N‑羟基谷氨酰氨的浓度1）本发明首次探明土壤中谷氨酰氨酶的测定方法；2）减少对设备要求的依赖性；3）方法准确度高，易操作；4）结果稳定可靠，重现性好。

主权项

一种检测土壤中谷氨酰胺酶活性的分析方法，其特征在于：1)称取过2‑4mm筛的土壤风干样品使用氯仿进行熏蒸；2)称取熏蒸后的土壤每份1克于n个硼硅酸盐试管中，n≥6，其中向n/2支加入0.3‑0.5ml反应液，另外n/2支加入0.3‑0.5ml对照液；3)向所有试管中加1.5‑1.8ml 0.2M的谷氨酰胺溶液。4)试管在室温条件下使用往复振荡器振荡50‑70分钟；5)振荡后加入4.0‑4.8ml终止液；6)静止3分钟；待固体颗粒沉淀后，取1.3ml上清液进行离心；7)取1ml离心后得到的上清液；8)使用分光光度计在540nm条件下比色；9)得到吸光度值A；10)根据吸光度值A和斜率b，计算所测定溶液中的5‑N‑羟基谷氨酰胺的浓度S，S＝A*b,其中样品中的浓度定义为S1,对照中的浓度定义为S2；11)计算土壤谷氨酰胺酶活性,单位为mmol·kg‑1·h‑1计算公式为：【(S1–S2)*V/1000】/W·T单位为mmol·kg‑1·h‑1式中：S1为样品中的羟基谷氨酰胺浓度，其单位为mmol/L；S2为对照中的羟基谷氨酰胺浓度，其单位为mmol/L；V为浸提液总体积，其单位为mL；W为土样重，其单位为kg；1000为单位转换系数；T土样培养时间，其单位为h；所述反应液为10.5ml吡唑缓冲液，吡唑缓冲液pH为7.15；0.9ml盐酸羟胺，其中盐酸羟胺800Mm；0.1ml浓度为100mM MnCL2l·4H2O；1.4ml浓度280mM KH2AsO4；0.14ml浓度为40mM二磷酸腺苷5’谷氨酸钠盐；对照液为11.95ml吡唑缓冲液，吡唑缓冲液pH为7.15；0.9ml盐酸羟胺；0.1ml MnCL2·4H2O；0.14ml二磷酸腺苷5’谷氨酸钠盐；终止液为21ml盐酸，20g三氯甲酸,55g FeCl3·6H2O溶于1L去离子水中。