[发明专利]基于γ-Fe2O3纳米粒子间接富集免疫磁分离的致病菌检测方法

摘要

一种基于γ-Fe2O3纳米粒子间接富集免疫磁分离的致病菌检测方法，属于食品安全致病菌快速检测技术领域。本发明依赖于建立的可以用于食品液体样本中致病菌的检测方法。利用1抗特异性结合目标菌，利用γ-Fe2O3纳米粒子材料制备2抗免疫磁珠针对性地富集1抗标记的目标菌株，通过分离捕获了目标菌的纳米磁珠，再硝化反应使之转化为铁离子，检验铁离子从而间接检测出样本中是否含有目标致病菌。在一定条件下铁离子的量与目标菌显示出线性关系，在一定范围能够定量检测目标菌。该方法可以用于食品样本中有害致病菌的快速检测，从而可以作为大批待检样品的快速筛选。

主权项

一种基于γ‑Fe2O3纳米粒子间接富集免疫磁分离的致病菌检测方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：1）将检测目标菌与目标菌的第1抗体结合形成1抗复合物；2）检测目标菌的1抗抗体，即2抗特异性免疫磁珠的制备；目标菌先与1抗结合形成复合物，用2抗特异性免疫磁珠富集、分离，1抗起信号放大作用；在本方法中，特异性免疫磁珠采用纳米材料制备，即是富集分离的手段，也是信号放大的载体，因此，在此也称为纳米探针；3）将目标菌1抗特异性单克隆抗体在固相载体上的固定；4）免疫磁珠富集目标菌株，并分离：将第2步制得的2抗免疫磁珠加入到第1步结合了1抗的待检样品，充分混合震荡，抓取目标菌后通过施加外加磁场，则磁珠就汇集到磁场一边，吸走上清液则分离出磁珠，若待检样本中有目标菌，目标菌首先与1抗结合形成1抗复合物，在加入2抗磁珠后，通过2抗与1抗的相互作用，从而捕获1抗复合物，被磁珠所富集，加无菌的去离子水则形成目标菌的磁珠悬浊液；5）将富集的磁珠悬浊液加到第3步固定了1抗的单克隆抗体的固相载体上，若待检样品中存在目标菌则形成双抗夹心，用无菌的去离子水清洗，则没有抓取到目标菌的磁珠就被洗掉，若不存在目标菌，则所有磁珠都被洗掉；6）之后，用洗脱剂将固定板上的双抗夹心的磁珠洗下来，用外加磁场分离磁珠的方法用无菌的去离子水清洗掉离子和溶剂，如果还存在磁珠就是抓到目标菌的磁珠；7）这部分磁珠，加入分析纯的硝酸和硫酸进行硝化反应，使磁珠γ‑Fe2O3转变为三价铁离子和二价铁离子，中和过量酸后通过检测方法检测出铁离子的量，从而可以算出磁珠的量，通过加标定量磁珠而在一定程度间接定量出目标菌的量。