[发明专利]冬油菜根质外体抗冻蛋白的提取方法

摘要

本发明涉及抗冻蛋白提取方法，尤其涉及冬油菜根质外体抗冻蛋白提取方法，利用该方法成功的从冷诱导的冬油菜根提取出了质外体抗冻蛋白。一种冬油菜根质外体抗冻蛋白的提取方法，其特征是包括有以下步骤：（1）采样；（2）提取缓冲液配制；（3）切条：（4）浸洗；（5）抽真空；（6）离心。通过本发明成功的快速从冷诱导的冬油菜根部提取出了质外体抗冻蛋白，为进一步研究冬油菜抗寒机理提供技术支撑。

主权项

一种冬油菜根质外体抗冻蛋白的提取方法，其特征是包括有以下步骤：（1）采样：在10至12月或至第二年1月份，在田间挖出油菜根，在3‑5分钟内放入冰盒，带回实验室，保存于3‑5℃冰箱；（2）提取缓冲液1000ml按下列重量体积配制：0.05M/L Tris‑Hcl                                      6.057g调ph到8.0；0.01M/L EDTA‑Na2.2H2O（乙二胺四乙酸二钠）             3.72g；0.02M/LVC（维生素c）                                  3.52g；用ddH2O定容至1000ml，配好的缓冲液在3‑5℃环境中保存；（3）切条：清除油菜根部携带的土壤、去除根部干死部分，流水冲洗10‑12min，杂物洗净为止，用ddH2O冲洗2遍，用滤纸吸干表面水分后，将根清洗后剖开切成1‑2cm长条；（4）浸洗：用上述缓冲液浸洗切成条的根；（5）抽真空：将切成条的油菜根放入带塞的容器中，加入80‑100ml上述缓冲液，抽真空，稳定到0.07‑0.08Mpa后，继续抽真空7‑10min；（6）离心：倒掉缓冲液，用滤纸吸去根表面溶液后，将其放入注射器内，将注射器放入50ml离心管，在转速为6100‑6200rpm，3‑5℃，离心14‑16min，收集离心管底部液体，即为非质体提取物。