[发明专利]一种基于人鼠杂交瘤细胞的水体有机污染的毒性评价方法

摘要

本发明公开了一种基于人鼠杂交瘤细胞的水体有机污染的毒性评价方法，包括萃取水样中的有机物；用水样有机物对细胞进行染毒处理；克隆培养；毒性量化。本发明对不同类型的水体有机污染进行基于生物体的毒性评价，弥补了单纯依靠水体理化指标变化对水质污染进行检测和评估的不足；对有机毒物的种类不具有特异性，适用范围广；培养皿经过宽离子束辐照改性后更加有利于细胞对培养皿的附着，有利于细胞的生长和存活，以及提高该评价方法的精准度；亚甲基蓝染液相比于结晶紫染液和吉姆萨染液，其成本更低，对细胞的毒性更小，具有很好的经济和环境效益，因此选用该染液对细胞克隆进行染色。

主权项

一种基于人鼠杂交瘤细胞的水体有机污染的毒性评价方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）萃取水样中的有机物；（2）用水样有机物对人鼠杂交瘤细胞AL细胞进行染毒处理；（3）克隆培养a、将染毒处理后的人鼠杂交瘤细胞种植在经过宽离子束辐照改性后的培养皿中；b、将培养皿在37℃，体积浓度为5%的CO2细胞培养箱中培养7～10天形成细胞克隆；（4）毒性量化c、对培养皿中的细胞克隆用PBS缓冲液清洗1～3次，使用固定液固定15～30分钟，用移液器吸去固定液，然后使用亚甲基蓝染液对细胞克隆染色，染色6～24小时，流水洗除染液后，空气干燥；d、计数培养皿中细胞克隆的个数，使用下面公式对水样的毒性进行评价：细胞种植率%=培养皿中的细胞克隆数/所种植的细胞数×100%；细胞存活率%=处理组细胞种植率%/对照细胞种植率%×100%。