[发明专利]从牛或猪胰脏中提取四种酶的生产工艺

摘要

本发明公开了一种从牛或猪胰脏中提取四种酶的生产工艺，它包括组织绞碎、酸浸提取、过滤分离、超滤浓缩、一段盐析、二段盐析、溶解激活、净化.过滤、脱盐浓缩、一段层析和二段层析等步骤，其主要技术特点是采用了分段盐析和分段层析技术，获得脱氧核糖核酸酶、糜蛋白酶、胰蛋白酶和激肽原酶四种酶产品。它工艺成熟、操作简便、成本低廉、活性和回收率高。

主权项

一种从牛或猪胰脏中提取四种酶的生产工艺，它包括如下步骤：(1)组织绞碎：将牛胰脏或者猪胰脏除去脂肪和结缔组织，用清水洗净，再用绞肉机绞碎；(2)酸浸提取：将绞碎的胰脏中加入水和硫酸溶液，固液重量比为1∶3～5，pH值为2.4～2.8，室温下搅拌浸提14～16小时，得浸提混合液；(3)过滤分离：将浸提混合液过滤分离，收集提取滤液，弃去固形物废渣；(4)超滤浓缩；将提取滤液用两级超滤膜过滤，用分子量为200，000～250，000D的超滤膜滤除大分子物质，用分子量为50，000～60，000D的超滤膜滤除小分子物质，收集浓缩提取液；(5)一段盐析：在浓缩提取液中，加入18％～20％(NH4)2SO4W/V，析出结晶沉淀之后过滤，获得脱氧核糖核酸酶盐析物，收集一段盐析滤液；(6)二段盐析：在一段盐析滤液中，加入42％～48％(NH4)2SO4W/V，析出结晶沉淀之后过滤，收集糜蛋白酶原、胰蛋白酶原和激肽原酶混合固形物，弃去二段盐析滤液；(7)溶解激活：将糜蛋白酶原、胰蛋白酶原和激肽原酶混合固形物用3～5倍的去离子水溶解，加入4％～6％CaCl2W/V，在4℃～5℃下由Ca++离子激活糜蛋白酶原和胰蛋白酶原，当糜蛋白酶活性达到400u/mg或者胰蛋白酶活性达到2000u/mg时，用盐酸调节pH值为3～3.5，终止激活，获得含有沉淀物的三酶混合溶液；(8)净化过滤：将含有沉淀物的三酶混合溶液进行净化过滤，滤除硫酸钙等沉淀物，获得净化三酶混合溶液；(9)脱盐浓缩：将净化三酶混合溶液用分子量50，000～60，000D的超滤膜和去离子水进行超滤脱盐，使膜内三酶混合溶液电导率小于800s/cm，获得三酶浓缩溶液；(10)一段层析：使用装填二乙酰氨基琼脂糖凝胶的层析柱，在三酶浓缩溶液中加NaOH调节pH值到6～7，上样、洗脱、收集一段层析通过液和一段层析洗脱液，一段层析洗脱液为纯化的糜蛋白酶溶液；(11)二段层析：使用装填双丙烯酰胺葡聚糖凝胶的层析柱，在一段层析通过液中加醋酸调节pH值到3～6，上样、洗脱、收集二段层析通过液和二段层析洗脱液，二段层析洗脱液为纯化的激肽原酶溶液，二段层析通过液为纯化的胰蛋白酶溶液；(12)步骤5获得脱氧核糖核酸酶盐析物，经过脱盐浓缩和丙酮沉淀，获得脱氧核糖核酸酶成品；(13)步骤8得到的糜蛋白酶溶液，步骤9得到的胰蛋白酶溶液和激肽原酶溶液，分别经过脱盐浓缩和冻干，获得糜蛋白酶成品、胰蛋白酶成品和激肽原酶成品。