[发明专利]通过结直肠癌免疫学指标CD3阳性表达量对结直肠癌患者的预后进行评价的方法

摘要

本发明公开一种通过结直肠癌免疫学指标CD3阳性表达量对结直肠癌患者的预后进行评价的方法，即首先将结直肠癌患者的组织蜡块制成组织芯片，然后进行免疫组化实验、免疫评分，根据免疫评分进行分组，最后将CD3阳性表达量低的一组和CD3阳性表达量高的一组的随访得到的患者生存期作为横坐标，将患者的总生存率作为纵坐标进行作图，根据所得的图形生存期和总生存率的关系进行分析来判定CD3阳性表达量与结直肠癌患者的预后效果，在CD3阳性表达量高的情况下，患者的预后相对较好，在CD3阳性表达量低的情况下，患者的预后相对较差。该评价方法准确、快速的预测结直肠癌患者的预后。

主权项

一种通过结直肠癌免疫学指标CD3阳性表达量对结直肠癌患者的预后进行评价的方法，其特征在于具体包括如下步骤：（1）、首先，将手术切除的64‑180个结直肠癌肿瘤组织标本进行石蜡包埋，制成组织蜡块；（2）、然后，根据HE染色确定步骤（1）所得的蜡块中肿瘤组织的位置，选取其中的肿瘤组织的中央部位制成含有64‑180个点位的组织芯片；（3）、接着，对步骤（2）所得的组织芯片、阳性对照和阴性对照进行免疫组织化学染色；其中所述的阳性对照使用已证实为阳性组织的肿瘤细胞组织制成的组织芯片；所述的阴性对照使用相同的组织芯片；（4）、组织芯片常规脱蜡、水化；（5）、微波抗原修复；（6）、灭活内源性过氧化物酶；（7）、封闭非特异性蛋白；（8）、滴加一抗CD3一抗用5%的牛血清白蛋白水溶液按1:50稀释，至于湿盒里4℃孵育过夜；阴性对照中以PBS缓冲液代替一抗；（9）、复温45分钟；（10）、滴加二抗；（11）、DAB显色；（12）、苏木素复染；（13）、脱水和透明；（14）、封片；（15）、结果分析：阳性信号为棕黄色颗粒，用Olympus光学显微镜在200倍放大倍数下，对上述所得的每个组织位点拍摄两张图片，计数图片中阳性染色细胞的数目；若阳性染色细胞数为0个，则免疫评分为0分；若阳性染色细胞数为1‑19个，则免疫评分为1分；若阳性染色细胞数为20‑49个，则免疫评分为2分；若阳性染色细胞数大于49个，则免疫评分为3分；（16）、根据步骤（15）所得的免疫评分进行分组，免疫评分为0、1的归为一组即为CD3阳性表达量低的一组，免疫评分为2、3的归为一组即为CD3阳性表达量高的一组；（17）、利用Graph Pad prism 5作图软件，将步骤（16）中CD3阳性表达量低的一组和CD3阳性表达量高的一组的随访得到的患者生存期作为横坐标，将患者的总生存率作为纵坐标进行作图，根据所得的图形生存期和总生存率的关系进行分析来判定CD3阳性表达量与结直肠癌患者的预后效果。