[发明专利]一种氧化低密度脂蛋白受体CD36低亲和性配体的化学合成方法

摘要

本发明属于生物化学工程领域，具体涉及到一种氧化低密度脂蛋白受体CD36低亲和性配体的化学合成方法。利用四甲氨基吡啶、N,N’-二环己基碳二亚胺、壬二酸和7-酮基胆固醇进行化学反应，通过萃取、拌样、装柱、纯化和收集得到oxLig-1，通过实验证明，化学合成的oxLig-1与从oxLDL中分离纯化的oxLig-1具有相同的生理活性，并且oxLig-1激活CD36介导的细胞信号传导。本发明利用化学方法合成了oxLig-1，并且与CD36低亲和性配体具有完全一致的化学结构，可激活ERK和JNK，并上调胆固醇流出基因——三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）的表达。

主权项

一种氧化低密度脂蛋白受体CD36低亲和性配体的化学合成方法，其特征在于，化学合成的步骤为：(1) 化学反应首先将催化剂0.1‑0.2 mM四甲氨基吡啶和0.15‑0.25 mM N,N’‑二环己基碳二亚胺溶于10 mL二氯甲烷中，20‑30 ℃下搅拌0.5‑1h，之后加入0.35‑0.75mM壬二酸，继续搅拌12‑24h，最后逐滴加入0.1‑0.15 mM 7‑酮基胆固醇，在40‑45 ℃下回流24‑48h之后，再在20‑30 ℃下反应48‑72h，用薄层层析鉴定化学合成的oxLig‑1，各物质摩尔比为壬二酸：N,N’‑二环己基碳二亚胺：四甲氨基吡啶：7‑酮基胆固醇= 3‑4：1‑1.5：1‑1.5：1‑1.5；(2) 反应后处理将反应产物进行减压过滤，除去副产物脲；饱和氯化钠溶液萃取3次，收集下层有机相，无水硫酸钠干燥12‑24h；(3) 拌样称取步骤（2）中得到的干燥产物3倍质量的100‑140目的拌样硅胶与干燥后的产物在1‑2ml 100%二氯甲烷中溶解，20‑30 ℃晾干；(4) 装柱称取步骤（3）中得到的产物的50倍质量的200‑300目的纯化硅胶，连续倒入柱子中，颠实；加入步骤（3）中得到的产物，最后压一层200‑300目薄层纯化硅胶；(5) 纯化首先用300‑500ml的100%氯仿洗脱、然后用200‑500ml的氯仿：甲醇=100：1，最后用100‑200ml氯仿：甲醇=75：1洗脱液进行洗脱；(6) 纯品收集将含纯品的氯仿：甲醇=100：1和90:1洗脱液收集，旋转蒸发后得到纯品。