[发明专利]一种提高白斑狗鱼全同胞家系构建成功率的方法

摘要

本发明公开的一种提高白斑狗鱼全同胞家系构建成功率的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：1）亲本选择及培育步骤；2）人工催产步骤；3）精卵采集及人工授精步骤；4）受精卵孵化步骤；5）平游前的管理步骤；6）鱼苗培育步骤；7）不同家系后代的荧光标记步骤。本发明有以下几个特点：1.本发明以亲本强化培育和注射人工催产激素相结合，解决了亲本性腺发育不同步和雄本精液量少的问题；2.结合白斑狗鱼精子活力的观察结果，配制了白斑狗鱼受精液，提高了受精率；3.通过控制孵化温度，实现了不同批次采集的受精卵的同期破膜问题。

主权项

一种提高白斑狗鱼全同胞家系构建成功率的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：1）、亲本选择及培育步骤春季从已性成熟的白斑狗鱼群体中，选择雌鱼体重为2kg以上、雄鱼为0.8kg以上，丰满度好，无病，无伤的个体，在池塘中进行驯养；所述池塘面积为6‑8亩，放养密度控制在150kg/亩为宜；驯养过程中，投放活体饵料鱼进行喂养，其中活体饵料鱼的投放量在春、夏、秋季按1:3的体重比投放活体饵料鱼，即每1kg白斑狗鱼投放活体饵料鱼3kg，每30天检查一次饵料鱼剩余情况，并即时投放适口的活体饵料鱼。冬季封冰前，按1:5的体重比投放饵料鱼，即每1kg白斑狗鱼投放活体饵料鱼5kg；2）.人工催产步骤翌年春季，池塘开冰，水温升至6℃时，再次对亲本进行筛选；挑选性成熟良好的雌、雄白斑狗鱼；然后向挑选出来的性成熟良好的雌、雄白斑狗鱼的胸腔注射鲑鱼释放激素类似物（SGnRH‑A）、维生素B1或/和地欧酮（DOM）合剂进行人工催产，催产后放入采卵预备池内继续进行喂养，采卵预备池的水温保持在6‑10℃；其中雌鱼分两次注射、针距为24h，第一次注射：5μgSGnRH‑A+1.5mg VB1+3mg DOM，第二次注射：25μg SGnRH‑A+3mgDOM；雄鱼1次注射，注射量为5μg SGnRH‑A+1.5mg VB1+3mg DOM；3）.精卵采集及人工授精步骤3.1）受精液配制配制浓度为200mmol/L的葡萄糖溶液，作为受精液；3.2）着卵板的制作及布置制作40cm×80cm×5cm木质结构的框架，底部用60目筛绢封闭，经5%的食盐消毒后形成着卵板，所述着卵板固定于采卵池内，筛绢与水面距离为5‑10cm；3.3）精卵采集及人工授精人工催产后3至4天后取出采卵预备池内的人工催产后的雌、雄白斑狗鱼一比一配组，进行人工采集精卵；其中每家系雌白斑狗鱼采集卵液标准为 吸水膨胀后300‑500ml，每家系雄白斑狗鱼采集的精液量为2个自然滴以上，将每家系所采用的卵液和精液混合后加300‑500mL的受精液，静置1min，随后8‑10℃清水脱粘10min，平铺于着卵板上进行人工繁殖得到受精卵；其中每100ml卵液中加入精液量为1个自然滴，每100ml卵液加入受精液的量为100ml；雌雄鱼采完精卵后，在背鳍前、侧线鳞上方注射PIT电子标记，并记录每尾亲本的标记号；为了减少家系后代间的生长差异，人工繁殖工作尽量保证在3天内完成；4）.受精卵孵化步骤：受精卵孵化在采卵池内继续进行，孵化水温控制在8‑13℃；不同批次采集的受精卵在8‑13℃水温范围内，以采卵顺序适当提高孵化温度，使不同采卵批次的受精卵胚胎发育阶段调整一致，从而保证不同家系受精卵的破膜时间一致；受精卵孵化后期，严格检测胚胎发育阶段和心跳速率；受精卵发育至破膜前期，心跳速率在90次/min时，每个家系的受精卵移至独立的孵化池中的着卵板上，进行破膜；所述着卵板的结构与步骤3.2)的着卵板结构相同；5）.平游前的管理步骤:受精卵开始破膜时，在孵化池中布置网目为40目的网片作为附着物；受精卵破膜后，撤出孵化池内的着卵板，清理死卵和卵膜后形成鱼苗培育池；所述鱼苗培育池保持水质清新，水温逐步提升至15℃；平游前水温控制在15‑18℃，池水溶氧量不得低于6mg/L；6）.鱼苗培育步骤：鱼苗培育期保证鱼苗培育池内溶解氧在6mg/L以上，水温控制在16‑20℃之间；鱼苗平游后的第二天，开始投喂卤虫，全长达到2.00cm时，投喂鲤、鲫鱼水花；鱼苗全长达3.00cm时，对每个家系后代中随机选留2000尾，在鱼苗培育池进行培育；7）.不同家系后代的荧光标记步骤：鱼苗全长达到10cm时注射荧光标记；根据Northwest Marine Technology公司的VIE荧光标记说明书配制不同颜色的标记液；在白斑狗鱼左右两个眼睛下方、背鳍和臀鳍基部注射荧光标记；完成标记的鱼苗在鱼苗培育池中暂 养1周后，观察标记情况，然后投放于同一池塘中进行养殖性能对比试验。