[发明专利]一种血液、尿液及组织中硝酸盐与亚硝酸盐的检测方法

摘要

本发明公开了一种血液、尿液及组织中硝酸盐与亚硝酸盐的检测方法。在弱酸性条件下硝酸根离子与离子对试剂形成离子对，亚硝酸盐与Griess试剂发生重氮化偶合反应，形成偶氮化合物，使不能在色谱柱上保留且无紫外吸收的硝酸盐与亚硝酸盐能同时在不同波长下进行液相色谱分析，消除了相互干扰。对于基体干扰大、且含量低的血液、尿液及组织中的硝酸盐与亚硝酸盐检测具有较大适用性，硝酸盐与亚硝酸盐检测限分别为0.2μg/mL和0.05μg/mL。该发明具有操作简单、测定快速、有效，准确等特点。

主权项

一种血液、尿液及组织中硝酸盐与亚硝酸盐的检测方法，包括以下步骤：（1）硝酸盐、亚硝酸盐标准工作曲线制作：分别取浓度为200μg/mL的NO3‑标准溶液0.20、0.4、0.6、0.80、1.00mL和浓度为20μg/mL的NO2‑标准溶液0.20、0.4、0.6、0.80、1.00mL，分别稀释至5mL，分别得到浓度为8.0，16.0，24.0，32.0，40.0μg/mL的NO3‑溶液和0.8，1.6，2.4，3.2，4.0μg/mL的NO2‑溶液；加入150μL GriessA试剂，混合均匀；1min后加入150μL GriessB试剂，混合均匀，放置5min后，进样10μL至液相色谱仪，经洗脱后，分别在220nm和510nm波长处进行测定；得到硝酸盐及亚硝酸盐回归方程、相关系数、相对标准偏差、回收率；（2）样品检测：尿液的检测：取10mL尿液，加入0.5～1.0g吸附剂，混合均匀，离心脱色，滤纸过滤除去吸附剂；取5mL脱色后的尿液，加入150μL GriessA试剂，混合均匀；1min后加入150μL GriessB试剂，混合均匀，放置5min后，进样10μL至液相色谱仪，经洗脱后，分别在220nm和510nm波长处进行测定；所述吸附剂为：活性炭、硅镁吸附剂、海泡石、凸棒石、直链藻、硅藻土、硅胶、活性氧化铝或壳聚糖中之一种，用量0.5～1.0g；血液的检测：取5mL新鲜血液，放入离心机中离心，取上清液，加入10%重量体积比的氢氧化钠溶液0.1mL和5%重量体积比的硫酸锌溶液1mL，离心分离，取上清液1mL加入50μL GriessA试剂，混合均匀；1min后加入50μL GriessB试剂，混合均匀，放置5min后，进样10μL至液相色谱仪，经洗脱后，分别在220nm和510nm波长处进行测定；组织匀浆的检测：取0.2g～1.0g组织块在生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，称重；量取3～5mL生理盐水于烧杯中，剪碎上述洗净的组织块，超声10min，使组织匀浆化；将制备好的匀浆放入离心机中离心，取上清液1mL，加入50μL GriessA试剂，混合均匀；1min后加入50μL GriessB试剂，混合均匀，放置5min后，进样10μL至液相色谱仪，经洗脱后，分别在220nm和510nm波长处进行测定。