[发明专利]一种酶法快速定量检测heparosan的方法

摘要

本发明提供了一种酶法快速定量检测heparosan的方法，所述方法包括：（1）取待测样品，溶于pH7.0~7.5的缓冲液中配制成样品溶液，混匀，25~35℃下平衡0.1~10min，加入足量Heparinase III酶，混匀，25~35℃水浴0.1~3h，加入HCl溶液，离心混匀，取上清液进行紫外分光光光度计检测，以未进行酶反应的样品为空白对照，读出样品的吸光度值A235nm；（2）配制梯度浓度的heparosan标准品溶液，按照步骤（1）方法进行反应和检测，绘制吸光度值与底物浓度的标准曲线；（3）对照标准曲线，根据样品吸光度值A235nm，获得样品溶液中heparosan浓度值，换算得到样品中heparosan含量。该方法与硫酸咔唑法、干重法相比具有专一性强，精度高、重现性好等优点。

主权项

一种酶法快速定量检测heparosan的方法，所述方法包括：（1）取待测样品，溶于pH7.0~7.5的缓冲液中配制成样品溶液，混匀，25~35℃下平衡0.1~10min，加入足量Heparinase III酶，混匀，20~35℃水浴0.1~3h，加入HCl溶液，离心混匀，取上清液进行紫外分光光光度计检测，以未进行酶反应的样品为空白对照，读出样品的吸光度值A235nm；（2）配制梯度浓度的heparosan标准品溶液，按照步骤（1）方法进行反应和检测，绘制吸光度值与底物浓度的标准曲线；（3）对照标准曲线，根据样品吸光度值A235nm，获得样品溶液中heparosan浓度值，换算得到样品中heparosan含量。