[发明专利]一种昆虫触角的透射电镜样品处理方法

摘要

本发明属于实验样品处理技术领域，涉及一种昆虫触角的样品处理方法，尤其涉及一种昆虫触角的透射电镜样品处理方法，依次由下述步骤组成，A.固定液的配制、B.各种包埋剂的配制、C.解剖、固定和漂洗、D.脱水和浸透、E.聚合，从而得到样品。本发明解决了在对昆虫触角进行透射处理过程中，固定液浸透困难、包埋剂浸透不充分的问题，可以使最后得到的样品切片比较平整，样品皱折、破损、丢失现象大大减少，样品切片内部结构均得到有效固定，亚细胞结构清晰可现。

主权项

一种昆虫触角的透射电镜样品处理方法，其特征在于：依次由下述步骤组成，A.固定液的配制：在含多聚甲醛及戊二醛的PBS缓冲液中，加入蔗糖，4℃保存，其中PBS缓冲液为磷酸盐缓冲液；B.各种包埋剂的配制：（1）SPI－PonTM812包埋剂的配制：将SPI–Pon812、DDSA、NMA和DMP–30，逐样加入烧杯中，用磁力搅拌器搅动均匀，当四种成分全加入后，用铝箔纸密封烧杯口，继续搅动约1小时，去掉铝箔纸，用真空干燥器将包埋剂中的气泡抽出，并在干燥器中静置片刻待气泡完全消失，将配制好的包埋剂转移入干燥的离心管或密封的注射器中，密封在放有硅胶干燥剂的塑料袋中，–20℃保存，使用时提前拿出，待恢复至室温即可使用，其中SPI–Pon812为环氧树脂，DDSA为2‑十二烯基丁二酸酐，NMA为甲基纳迪克酸酐，DMP‑30为2‑4‑6‑三(二甲氨基甲基)苯酚；（2）Spurr(4221)包埋剂的配制：将ERL 4221、DER 736、NSA和DMAE，逐样加入烧杯中，用磁力搅拌器搅动均匀，当四种成分全加入后，用铝箔纸密封烧杯口，继续搅动约1小时，去掉铝箔纸，用真空干燥器将包埋剂中的气泡抽出，并在干燥器中静置片刻待气泡完全消失，将配制好的包埋剂转移入干燥的离心管或密封的注射器中，密封在放有硅胶干燥剂的塑料袋中，–20℃保存，使用时提前拿出，待恢复至室温即可使用，其中ERL 4221为环氧树脂，DER 736为聚乙二醇环氧树脂，NSA为壬烯基琥珀酸酐，DMAE为二甲乙醇胺；C.解剖、固定和漂洗：取昆虫成虫，放入盛有固定液的瓶子中，在固定液中将昆虫成虫杀死，在固定液中解剖下昆虫头部，放入盛有固定液的另一个瓶子中，用橡胶皮塞将盛有样品的瓶子密封好，用注射器手动对样品进行抽真空操 作，直至样品完全下沉，将瓶子里的样品转移到装有新鲜固定液的离心管中，前固定，前漂洗，再用锇酸溶液进行后固定，后漂洗；D.脱水和浸透：用梯度乙醇溶液及环氧丙烷对漂洗好的样品进行脱水处理，再用环氧丙烷和包埋剂的混合液对样品进行梯度浸透，然后换管，用包埋剂浸透样品；E.聚合：将样品表面的树脂吸净，放入包埋板上盛有包埋剂的包埋孔中，再进行整姿处理，将包埋板放入烘箱中加热使包埋剂聚合，样品处理完成。