[发明专利]一种同时检测动物血浆中青蒿琥酯及二氢青蒿素含量的方法

摘要

本发明公开了一种检测动物血浆中青蒿琥酯及二氢青蒿素含量的测定方法。其步骤是先用溶剂提取血浆样品，所得样品液用固相萃取技术处理，将上述处理好的固相萃取小柱，用醋酸和甲醇醋酸溶液冲洗，最后用乙酸乙酯和1-氯丁烷洗脱，收集洗脱液，氮气吹干，残渣用甲醇溶解，即得供试品溶液，用HPLC-MS/MS进行准确测定羊血浆中青蒿琥酯及二氢青蒿素的含量。青蒿琥酯最低检测线为0.1ng·mL^-1，二氢青蒿素最低检测线为1ng·mL^-1。本发明减少了杂质的影响，富集了样品浓度，专属性强，分离效果好，方法线性、稳定性、重现性、回收率试验均达较好的技术要求，该方法为药物在生物体内的药物代谢动力学及生物等效性研究奠定了方法学基础。

主权项

一种同时检测动物血浆中青蒿琥酯及二氢青蒿素含量的方法，其步骤是：a. 精密称取青蒿琥酯标准品、二氢青蒿素标准品，分别置于棕色容量瓶中，用色谱甲醇或乙腈配制得标准品溶液；精密称取青蒿素标准品，置于棕色容量瓶中，用色谱甲醇或乙腈配制得内标溶液；b. 取动物空腹静脉血浆，加入上述a得到的标准品溶液和内标溶液，涡旋混合40‑50s，得血浆样品；动物给药后取静脉血浆，加入上述a得到的内标溶液，涡旋混合40‑50s，得供试样品；c. 将b步骤所得的血浆样品和供试样品分别加入2倍体积乙腈沉淀蛋白，涡旋震荡30‑40s，离心，取上清液；d. 固相萃取小柱处理为取固相萃取小柱，加1ml甲醇和1ml 1M醋酸冲洗，再用1ml甲醇冲洗，备用；e. 将c步骤得到的上清液分别上处理好的固相萃取小柱，用1M醋酸和20%甲醇醋酸溶液冲洗，最后用乙酸乙酯和1‑氯丁烷(V:V=2:3)洗脱，收集洗脱液，氮气吹干，残渣用甲醇或乙腈溶解，即得标准血浆溶液和供试品溶液，备用；f. 高效液相色谱‑串联质谱联用（HPLC‑MS/MS）测定供试品溶液，测定条件用碳十八烷基键合硅胶固定相色谱柱，流动相A:B=60:40（v:v），其中A:乙腈；B：纯净水（1mmol乙酸铵，0.1%甲酸，0.02%乙酸），流速0.4mL· min^‑1，电喷雾离子化（ESI）模式，正（+）离子多反应监测，毛细管出口端电压：45v；碰撞能量：25v；deta EMV+：200v；干燥气体（N₂）流速10L·min^‑1，喷雾器30psi，气体温度350℃，毛细管电压 4000 V；g. 将e得到的标准血浆溶液和供试品溶液按f所述色谱质谱条件进样，得到总离子流图和质谱图，测定峰面积，分别以青蒿琥酯和二氢青蒿素浓度（X）为横坐标，青蒿琥酯、二氢青蒿素分别与内标青蒿素的峰面积比值（Y）为纵坐标绘制标准曲线，进行线性回归，得回归方程，计算待测物浓度。