[发明专利]使用人工MICRORNA以沉默基因家族的方法和组合物

摘要

本发明提供了方法和组合物使得单个microRNA(niRNA)降低了相同蛋白和／或基因家族的至少两个成员的表达水平。虽然单个21碱基对niRNA能导致多种mRNA发生裂解，整个基因家族不能被沉默，除非该基因家族在也能被单个miRNA裂解的21个碱基对区域内共有相近的同一性。在某些实施例中，给定蛋白和／或基因家族的所有成员可为本文所公开的miRNA表达构建体所抑制，即使它们在也能以miRNA起作用的21碱基对区域内不具有相近的同一性。此类方法和组合物采用了miRNA表达构建体，其具有结构使得由所述构建体产生的丰度最高的miRNA形式为22-核苷酸的miRNA。由miRNA表达构建体产生的22-核苷酸的miRNA进而不仅降低了miRNA靶序列的表达水平，也降低了作为靶序列的来自相同蛋白和／或基因家族的至少一个其他序列的表达水平。

主权项

能够被转录为RNA序列的分离或重组多核苷酸，其中所述多核苷酸包含miRNA表达构建体，其中所述miRNA表达构建体包含：a)miRNA前体主链，所述miRNA前体主链包含编码miRNA的第一多核苷酸片段和编码星序列的第二多核苷酸片段；b)所述第一多核苷酸片段和所述第二多核苷酸片段与所述miRNA前体主链是异源的；c)所述第一多核苷酸片段包含22‑核苷酸(22‑nt)，所述22‑核苷酸(22‑nt)具有与RNA水平待降低的靶序列足够互补的序列；d)所述第二多核苷酸片段包含所述第一多核苷酸片段的互补序列，并且还比所述第一多核苷酸片段少至少1个核苷酸，其中22‑nt miRNA是由所述miRNA表达构建体产生的丰度最高形式的miRNA；并且e)由所述miRNA表达构建体产生的所述22‑nt miRNA能够降低所述靶序列和来自相同蛋白和／或基因家族的至少一个其他序列的mRNA水平，所述相同蛋白和／或基因家族的成员不会被针对与22‑nt miRNA相同的区域的21‑nt miRNA所降低。