[发明专利]一种检测烟草料液中4-甲基咪唑含量的方法

摘要

本发明公开了一种检测烟草料液中4-甲基咪唑含量的方法。该方法包括将烟草料液或糖料准确称量、添加2-乙基咪唑内标并溶解后，经过C18-SPE小柱纯化，用LC-MS/MS法在反相条件下进行分析检测。检测样品中4-甲基咪唑采用内标校准曲线法进行定量测定，计算出烟草料液或糖料中4-甲基咪唑的含量。本发明提供了一种检测限低、稳定性好、前处理简单、快速准确的烟草料液或糖料中4-甲基咪唑的分析检测方法，适用于烟草行业和烟草添加剂生产企业对烟草料液或糖料中4-甲基咪唑的分析检测，填补了这一技术领域的空白。

主权项

一种检测烟草料液中4‑甲基咪唑含量的方法，该方法包括以下步骤：（1）样品准备：准确称取0.6g～3.0g待测样品，精确至0.1mg，加入2‑乙基咪唑内标溶液，用水或0.1～1%的乙酸或甲酸水溶液稀释至5～25mL，控制使2‑乙基咪唑在稀释后样品中的浓度为10ppb，摇匀;（2）SPE柱纯化：依次用6mL甲醇、12mL水与10mL 0.1～1%的乙酸或甲酸水溶液活化和平衡6mL规格的C18‑SPE小柱，活化和平衡SPE柱的柱流速为1～2mL/min；取2mL步骤（1）所述的稀释后样品用活化好的C18‑SPE小柱纯化，上样后依次用6mL0.1～1%的乙酸或甲酸水溶液、6mL水淋洗，再用10mL 10%的乙腈水溶液洗脱4‑甲基咪唑，取2mL洗脱液用0.22μm水相滤膜过滤，滤液待LC‑MS/MS检测；（3）制备标准溶液：配制4‑甲基咪唑浓度分别为1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL和100ng/mL的标准溶液，每个标准溶液中2‑乙基咪唑内标的浓度均为10ng/mL；（4）建立标准溶液工作曲线：以4‑甲基咪唑浓度与2‑乙基咪唑内标浓度的比值为横坐标，以4‑甲基咪唑定量离子对的峰面积与2‑乙基咪唑内标定量离子对峰面积的比值为纵坐标，建立4‑甲基咪唑的标准溶液工作曲线；对标准溶液检测数据进行线性回归，求得4‑甲基咪唑的回归方程，R2应不小于0.999；（5）实际样品检测：测定步骤（2）得到的待测滤液中4‑甲基咪唑子离子峰面积与2‑乙基咪唑内标子离子峰面积，使用标准溶液工作曲线计算待测滤液中的4‑甲基咪唑浓度，进而换算出样品中的4‑甲基咪唑含量；LC‑MS/MS 的检测条件为：色谱条件：Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱(2.1mm i.d．×100mm，1.7μm)，流动相为乙腈：10mmol/L乙酸铵水溶液=12%：88%等度洗脱，色谱柱温度35℃，进样量2μL，流速0.2mL/min，运行时间10min；质谱条件：采用ESI正离子检测模式，利用针泵直接将含内标浓度标准溶液注入质谱仪，改变质谱参数找出准确的M+1峰及信号较强的碎片离子，以母离子与子离子组成监测离子对，以多反应监测方式对待测组分进行定性定量检测。