[发明专利]一种温度控制细胞培养方法

摘要

一种温度控制细胞培养方法，属于细胞生物学技术领域。工艺步骤为：微载体准备、细胞接种、细胞培养的温度控制、细胞增殖情况检测。优点在于，在一些特殊条件下，如空间细胞搭载时，在飞行器入轨前，通过温度控制，使细胞处于休眠状态，细胞不受外界环境影响，飞行器入轨后再通过温度控制激活细胞，这样不仅能获得较多的活细胞，保证了有足够的实验材料进行后续实验，同时细胞只受空间环境的影响，减少了在飞船入轨前细胞受到的影响，更能准确反应空间环境对细胞的影响，同时不需要航天员额外的操作，较少了航天员的工作量及工作难度。

主权项

一种温度控制细胞培养方法，其特征在于，工艺步骤如下：（1）微载体准备称取100‑500毫克微载体于离心管中，加入10‑40毫升磷酸盐缓冲液DPBS，室温浸泡1‑4小时后，更换新的磷酸盐缓冲液进行清洗2次后，去除磷酸盐缓冲液，放入高压灭菌锅115‑121℃灭菌15‑30分钟；取出后去除多余水分，加入含体积百分数5‑10％胎牛血清的完全培养基平衡10‑24h，得到用于细胞生长的微载体；（2）细胞接种取处于对数生长期的肿瘤细胞或原代培养细胞，细胞数量为1‑10×106个，用0.05‑0.25体积％的胰蛋白酶消化后，用细胞计数板计数细胞数量，使用含1‑15体积％胎牛血清的完全培养基调整细胞数量为0.5‑2×105个细胞 /毫升，加入步骤（1）得到的用于细胞生长的微载体，使其浓度为1‑10毫克/毫升，得到细胞与微载体的混合物；将该混合物置于培养皿内，放入37℃、5％CO2的培养箱中，1‑5小时内每15‑30分钟摇晃一次培养皿，使细胞与微载体完全接触；培养4‑16小时后，细胞已全部贴附于微载体上生长；（3）细胞培养的温度控制将步骤(2)得到的已生长于微载体上的细胞，转入新的培养皿中，加入含1体积％或10体积％胎牛血清的完全培养基，盖上盖子，封口膜封口，分别放置于20‑25℃及37℃温度控制器内;(4)细胞增殖情况检测生长于微载体上的细胞，在20‑25℃及37℃温度控制器内放置24‑240小时后，取出摇匀，取100‑1000微升细胞悬液，加入1‑15体积％的CCK‑8，25‑37℃孵育1‑4小时，取上清液于酶标板中，使用酶标仪在450‑550纳米波长下检测上清液的OD值，OD值反应细胞的増殖。此时细胞不増殖，细胞处于休眠状态，但仍有活性；将含1％胎牛血清的培养基换成含10％胎牛血清的完全培养基，将温度控制器升温至37℃继续培养24‑240小时，取100‑1000微升细胞悬液用上述CCK‑8方法检测细胞增殖情况，此时细胞已开始増殖，且与一直放置于37℃培养的对照组细胞没有显著差异。