[发明专利]小反刍兽疫抗体检测的竞争ELISA试剂盒及其制备方法

摘要

本发明公开了一种检测小反刍兽疫病毒抗体的竞争ELISA试剂盒，所述试剂盒包含包被抗原反应液和单克隆抗体反应液构成的检测体系，属于生物技术领域。该试剂盒采用原核表达的小反刍兽疫Nigeria 75/1株N蛋白作为包被抗原，N蛋白单克隆抗体为竞争抗体，依据竞争ELISA原理检测羊血清中小反刍兽疫病毒的抗体。本发明的试剂盒可快速而特异地检测血清中小反刍兽疫病毒抗体，同时还具有规模性生产单克隆抗体的优势，反应特异性好，灵敏度高，其操作简单、成本低廉，反应结果稳定可靠、易于观察，非常适用于羊的进出口检疫、食品卫生以及畜牧饲养场的大批样品的筛查，易于大范围推广应用。

主权项

一种小反刍兽疫抗体检测的竞争ELISA试剂盒，包括制备得到的小反刍兽疫重组N蛋白抗原、N蛋白单克隆抗体、酶标板、阴性对照、酶联物、显色剂A&B、终止液，所述的小反刍兽疫重组N蛋白抗原的制备方法包括：采用上游引物5′CGGAATTCATGGCTACTCTCCTTAAAAGCT3′和下游引物N‑DN：5′ACGCGTCGACTTAGCTGAGGAGATCCTTGT3′，分别在上下游引物5′端引入酶切位点EcoR I和Sal I；通过RT‑PCR方法从小反刍兽疫细胞毒RNA中获得N基因的ORF，构建其原核表达载体pGEX‑4T‑1，将重组质粒转化BL‑21宿主菌，进行小反刍兽疫重组N蛋白抗原表达并提取小反刍兽疫重组N蛋白抗原。