[发明专利]莪术醇单克隆抗体在含莪术醇类中药中的免疫分析应用

摘要

本发明涉及一种莪术醇单克隆抗体在含莪术醇类中药中的免疫分析应用，其方法为：应用杂交瘤技术制备出天然小分子化合物莪术醇的单克隆抗体，再以莪术醇单克隆抗体为一抗，采用酶联免疫吸附分析法（ELISA法）对莪术醇进行的定性与定量分析。本发明的优点是：灵敏度高、特异性好、样本前处理简单、检验批次大、操作简便，适于大批量检验及在线监测。

主权项

莪术醇单克隆抗体在含莪术醇类中药中的免疫分析应用，其特征是：以莪术醇单克隆抗体为一抗，采用酶联免疫吸附分析法对莪术醇进行的定性与定量分析，具体包括如下步骤：（1）供试品的制备：采用挥发油提取器提取挥发油，所得挥发油以无水硫酸钠除去水分，以乙醚定容，做供试品；（2）标准曲线的绘制：莪术醇标准品用20%甲醇做系列浓度稀释，以莪术醇单克隆抗体为一抗，进行竞争ELISA反应，405nm测定OD值，以莪术醇标准品浓度‑A405 nm做标准曲线；（3）ELISA法：用pH 9.6的PBS将Cur‑HSA配制为浓度为1μg/ml的溶液，以100μl/孔包被96孔免疫板，37℃孵育1h; 用含5%脱脂奶粉的PBS溶液于37℃封闭2 h：加入1∶6400倍稀释的莪术醇单抗（用PBS稀释）100μl/孔，再加入供试品100μl/孔，37℃孵育1 h，加入羊抗鼠酶标抗体(1∶1000稀释)100μl/孔，37℃孵育1 h，加ABTS显色液，100μl/孔，于37℃反应15 min，用酶标仪读出各孔在波长405 nm处的吸光度值(A405 nm)，空白对照为PBS，每一浓度的供试品设置3个平行孔。